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溴甲酚绿法测定血清白蛋白（二）
关键词：农药标准品 环境监测标准物质 标准品进口 中检所对照品溴甲酚绿法测定血清白蛋白（二）
【临床意义】
1．血清白蛋白浓度增高 常见于严重脱水所致的血浆浓缩。
2．血清白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低主要见于大出血和严重烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿、肝功能受损、肠道肿瘤及结核病伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于20g／L，临床上出现水肿。
3．A／G比值 某些患者可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者A／G比值<1．0，这种情况称为A／G比值倒置。
4．文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。
【注意事项】
1．BCG是一种pH指示剂，变色域为pH 3．8(显黄色)～5．4(显蓝绿色)，因此控制反应液的pH是本法测定的关键。
2．配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸橼酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥珀酸盐缓冲液的校准曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐配方。
3．试剂中的Bnij-35也可用其他表面活性剂代替，如吐温-20或吐温-80，终浓度为2ml/L。
【评价与思考】
1．白蛋白是血清内含量最多的一种蛋白质，以前用半饱和硫酸铵盐析法沉淀球蛋白，再用总蛋白测定方法测定上清液中的白蛋白。目前测定白蛋白的方法有电泳法、免疫分析法、染料结合法，以染料结合法最常用。白蛋白具有与阴离子染料溴甲酚绿(bromcresolgreen，BCG)和溴甲酚紫(bromcresol purple，BCP)结合的特性，而球蛋白基本不结合这些染料，故可直接测定血清白蛋白。BCG法和BCP法灵敏度高、操作简便、重复性好，能自动化。其中BCG法最常用，但BCG对血清白蛋白特异性稍差。BCG不仅与白蛋白呈色，且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以α1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其应速度较白蛋白稍慢。由于在30秒内呈色对白蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用白蛋白定值血清作标准。BCP在pH 5．2条件下，有Brij存在时，可与白蛋白结合形成绿色复合物，于603nm进行检测。pH 5．2接近于α—和β—球蛋白的等电点，抑制了这两种蛋白与BCP的非特异性反应，故对测定白蛋白特异性高。BCP与白蛋白的反应为即时完全反应，不受时间和温度变化的影响，呈色后稳定1小时以上。BCP与牛、猪(新鲜或冻干)血清白蛋白反应仅为BCG反应的1／3，不宜用动物血清白蛋白作校准品或质控物。
2．溴甲酚绿法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血无干扰，既可手工操作，又能自动化分析，是目前国内测定血清白蛋白的最常用方法。线性范围为10～60g／L。，RCV<4％。
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