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如何又快又好地冻存细胞?

2015.11.04

  细胞冻存是细胞培养中的重要环节。大家都知道,冻存技术要点是慢冻,标准的冻存程序为降温速率-1~-2ºC/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5 ºC~-10 ºC /min。之前,常用的传统方法是将冻存管置于4 ºC 30分钟--->-20 ºC 60分钟--->-80 ºC过夜--->液氮罐。不过,由于步骤较多,间隔时间又长,很容易遗忘。

  之后,人们也开始使用程序降温盒。将冻存管放入程序降温盒中,再将程序降温盒放入-80ºC冰箱。由于程序降温盒中填充了异丙醇,所以能以1ºC/min的速度进行降温。然而,异丙醇属于有毒溶剂,又容易挥发,长期使用不但会对环境造成污染,也对实验人员的安全有不利影响。

  迈阿密大学生物系的Kai Y为我们介绍了一种新的细胞程序降温盒。这种名为CoolCell的降温盒由美国Biocision公司生产,不需要使用酒精,就能以1ºC/min的速度对细胞降温。他表示,这种容器很容易放冻存管,在冷冻之后也很容易打开,使用很方便。

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  基于热传导原理和精密工程而开发,CoolCell可精确控制降温速度,适用于原代细胞、细胞系、干细胞、酵母及其他细胞类型。同时,由于不使用异丙醇,也更加环保。

  据介绍,目前CoolCell已经被包括ATCC等众多机构以及科研单位所采用,代替他们之前使用的基于异丙醇的细胞程序降温盒。从客户的反馈来看,CoolCell与之前的产品在冻存细胞效果上一样好,尤其是在原代细胞的冻存上,CoolCell的结果更加稳定。

  之前,研究人员利用CoolCell及其他常用的方法对两种胚胎干细胞系(RC-7和RC-10)进行冻存,并比较解冻后的细胞复苏率。他们发现,使用CoolCell,活细胞数提高33%,而附着在组织培养板上的干细胞数量增加。此外,不使用异丙醇,每年可节省相关的处理费用340美元。

  如今,CoolCell这种细胞冻存方案已经被收入《Current Protocols in Immunology》的Cryopreservation and Thawing of Cells中,作为细胞冻存的标准protocol进行推广。这种降温盒也有多种规格,适合不同大小的冻存管,在选购时需要注意。

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