【求助】 一抗体类蛋白在纯化过程中纯度偏低,该从...

最新回复

• newway (2015-4-10 10:08:54)

  
  你这顺序颠倒啊，先离子在疏水是个正常逻辑

• newway (2015-4-10 10:12:14)

  
  你应该找下亲和层析的胶

• dog002 (2015-4-10 10:18:36)

  
  或者 分子筛+疏水

• dog002 (2015-4-10 10:23:46)

  
  主要是离子层析分辨率不高，但浓缩作用明显，作为第一步层析还可以，第二步效果不明显

• ending (2015-4-10 10:27:44)

  
  估计这个可以在疏水层析收峰前加一步洗杂
  或者把离子交换收峰的盐浓度降低些

• gogo (2015-4-10 10:28:29)

  谢谢大家,是想找原因改进,但不能改工艺

• ending (2015-4-10 10:37:38)

  简单说下你的工艺流程，你不会想2步就纯化完成吧？
  
  另外，你的目的是什么，是想制备点蛋白做研究，还是开发下游纯化工艺？这是2个概念，工艺设计也不一样。
  
  疏水层析高分子含量偏高 是什么意思？聚集体含量高？如果你是做工艺开发，建议第一步还是protein A亲和层析，现在第一步不是亲和的申报都会被质疑。
  
  离子交换需要进行工艺优化：load pH，load cond，load capacity，wash pH，cond，elution pH，cond，如果离子交换SEC纯度，建议进行优化，或者DOE筛大范围，再优化。
  
  我用50um的离子分mAb的charge variant，能够去掉27%的 basic component及5%的acidic component，收率还能在55%左右。优化很重要。