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【求助】银染不能染出蛋白点了！
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我做双向已经有一段时间了，前段时间做预试验的时候把染色步骤已经做得很明白了，重复性很高。但是现在做正式实验的时候却出现银染不能出结果了。以前含量很高，非常明显的标致点，现在却出不来，后来试了考染，居然能出来。好奇怪！！！！小妹可以保证所有样品，试剂，方法，时间都是一致的，请教各位为什么会出现这种问题呢？
小妹真的很疑惑，拜托了！！
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最新回复
leifengta (2014-4-18 16:45:10)
我一直没染出来,不知道是不是我用国产的试剂的原因了
Ao7 (2014-4-18 16:56:24)
是不是你洗的时间太长了？
这个不能超一点点的
我以前也碰到过
不过后来注意洗 的时间就好了
tangxin_80 (2014-4-18 16:57:23)
银染对水的要求比较高，这也是实验成败的一个关键。
misswu61 (2014-4-18 16:57:51)
而这些点做考染就可以显现出来
wmp1234 (2014-4-18 16:58:16)
是一个点也染不出来呢，还是普遍染的颜色很浅呢？
此外，请说明你用的是那种银染方法或哪个公司的试剂盒。
我一般用安玛西亚的银染试剂盒。
就我的经验来说：
1．如果是一个点也染不出来，那要怀疑你一些重要试剂的质量了。比如硝酸银是否变质，或敏化液中硫代硫酸钠的质量等等。
2．如果是普遍染的颜色很浅，则个人认为，最有可能是因为水洗的时间过长，正如feiziwif战友所说的，水洗这步，要严格控制时间的。
misswu61 (2014-4-18 17:00:46)
是以前很快出来的，量很大的蛋白点不能染出来了（糖蛋白），而那些量很小的点，现在仍然可以出来，
misswu61 (2014-4-18 17:01:06)
我不是用的试剂盒，是自己配的。所有试剂都有质量保证的。
misswu61 (2014-4-18 17:01:55)
如果是水洗的时间过长，那为什么后来那些量很小的，颜色很浅的点都能出来呢？照理说同样的洗脱时间，不可能量少的蛋白没被洗掉，而非常大的蛋白却被洗掉了吧？
tangxin_80 (2014-4-18 17:09:19)
还原时间不够,样品处理时增加和DTT的反应时间
huifeng0516 (2014-4-18 17:09:38)
NAHC03有问题 可能是...我也遇到好几回！
3648755 (2014-4-18 17:16:35)
室内的温度不要太高，这也是实验成败的关键！
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