【求助】养细胞经常无缘无辜的染菌？

最新回复

• join (2014-12-04 16:06:47)

  
  你这个问题说大不大，说小也不小。说不大呢，七个字就可以回答你：严格按照无菌要求。说不小呢，这无菌要求的话匣子一打开太大。还是简要吧：1.将试验用品放入超净工作台用紫外线照射30分钟；2. 照射30分钟后，进入缓冲间，换灭菌的无菌衣，换专用拖鞋；3.手部用5％的洁尔灭浸泡2分钟，进入洁净区后，用75％的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。4.最好戴口罩；5.操作时尽量靠近火焰；6.装培养基的瓶子等不要直接口向上，用一个架子斜放，瓶口朝向火焰；7.标准操作，不要让无菌吸管到处碰来碰去；8.中途出入无菌室，再次操作时，一定要再次用75％的酒精棉球消毒。 一下也想不了那么多，具体的你再问吧。最好把你怎么操作的过程描述一遍，我们就好针对性的指出错误了

• yhz1973 (2014-12-04 16:07:04)

  建议你把细胞室，好好清理一下，污染是这样的，出现一次就比较麻烦， 千万别急。 ，还有，你们的紫外灯没有问题吧？

• zbboom (2014-12-04 16:11:23)

  非常感谢楼上的回信，在操作中我也严格按照无菌要求去做，因为操作台是公用的，而其它同学很少染菌，我想主要问题应在我身上，但是又找不到主要原因。我一般是这样操作的：紫外照后，用酒精棉檫拭手部开始操作，基本步骤是吸培养液到方瓶，再在方瓶中吹打混合，按比例传代，有时吸管头部碰在培养瓶口，有时吸管口棉花塞的太紧或太松不好用，有时原因都找不到，请各位指点。

• dream2013 (2014-12-04 16:11:41)

  
  戴手套试试吧！

• ladyhuahua (2014-12-04 16:11:56)

  
  和楼主一样痛苦啊！！！ 刚调好状态准备铺板，又污染了！！！

• viviwang1987 (2014-12-04 16:12:13)

  
  最好是涂片看看是什么菌？注意操作，吸管碰别处立即更换。污染是常有的事，也不必太给自己压力，熟能生巧。

• free (2014-12-04 16:12:32)

  你的滴管吸管进培养液瓶和细胞培养瓶前要在酒精灯上仔细烤一下，滴管不要反复用。 其实无菌操作第一重要的就是你的超净台是不是还能用，滤网要及时清洗的。其次就是瓶口、滴管、移液器操作是过火的是否正确。 还有一点很重要，手一定不能在任何瓶口上方经过！

• wanglaoshi (2014-12-04 16:12:46)

  从你操作的步骤来看，你的细胞应该是很好操作的。没看到你要用消化液，这就减少了污染的机会。你用的吸管是自己做的吗？经常练练，熟能生巧，时间长了，你就知道如何控制所塞的棉花量了。（用牙签或12号针头等工具来塞比较方便，塞完后用火将露出的部分烧掉再灭菌，这样就不会在上吸耳球的过程中，出现将棉花弄掉的情况），另外，你要勤剪指甲，不要戴首饰，吸管一周灭一次菌，不要没用完老用。
  

• abc816 (2014-12-04 16:13:03)

  操作是导致污染的最主要原因
  
  根据本人的经验，操作是导致细菌污染的最主要原因。 本人以前曾经在一个相当严格的实验室工作过，那里的细胞室的要求是按照外科手术室要求的，更衣，换鞋，洗手，酒精擦手，戴口罩、帽子，所有培养液中加双抗，所有细胞操作器械专用；每天紫外灯照射40分钟后才允许进入。但是，就是这样的条件，操作不好，一样要污染。 现在本人工作的实验室要求比那个实验室差的天远地远，但是只要操作仔细了，一样可以把最难养的细胞养好。本人曾经参观过一些名人进行细胞操作，也就是换上拖鞋，连工作服都不换就进细胞室，细胞一样没有问题。所以，最主要的是：工作服，尤其是袖口，消毒情况如何，袖口是否能够扎紧。如果不能保证，不如索性把袖口挽起来，把手臂用酒精擦一遍（其实我本人连擦都懒得擦，一样没事）。操作时，滴管两头都要烧。还有一点很重要，就是滴管头在加液体的时候，不要深入瓶口太多。在倒培养液的时候，可以拿起培养瓶直接倒，但是注意要倒干净，瓶口沾的最后一滴液体千万不可回流倒瓶内。 还有一些基本的问题，比如瓶口要多烧一会，怀疑滴管有污染就一定要换。一旦细胞出现污染的迹象了，就一定要扔掉。如果实在想挽救，可以用一些高档抗生素（医院里给病人加药后的药瓶，用无菌盐水涮涮就能用，浓度足够），但要小心浓度太高细胞也会死亡。
  

• yes4 (2014-12-04 16:13:24)

  看了这么多的回复，其实也没这么麻烦的，我想主要注意以下几点就可以了： 1、塞在吸管端的棉段在1cm以上，稍紧一点，如不熟练，最好再包一层牛皮纸或锡铂纸，干烤消毒比较好，140度二个小时以上； 2、注意台内布置，保持整洁； 3、每次操作前75%酒精擦拭双手（有的人不擦照样不污染）； 4、更重要的一点是：操作时双手或任何可疑的东西尽量不要在暴露的瓶口上方移动！！应绕道而行。一般污染多是不注意台内的层次感，其实这一点是很重要的； 5、找根本原因：向不污染的人要一些培养基或消化液什么的作作对照。 这方面有问题多与我联系！
  

• bgf5 (2014-12-04 16:13:41)

  注意培养瓶的瓶口，还有你的培养基、胰酶配好后都要划块血平板，到第二天，看看有无菌生长，如无菌，方可用，还有培养基、胰酶等过滤灭菌后最好用小瓶分装（100ml~250ml) 防止一但污染，损失和浪费就大了，还有操作用的器具都要高压灭菌。

• uuooii (2014-12-04 16:13:57)

  
  虽然我不长期从事细胞培养，但我曾经养过一次细胞，是成功的，楼上的高手都已经说了很多了，我想告诉你在取材时也应该严格按照无菌操作，在无菌工作台操作时请穿上一次性手术衣。祝你成功。
  

• PCR (2014-12-04 16:14:28)

  最好是涂片看看是什么菌？注意操作，吸管碰别处立即更换。污染是常有的事，也不必太给自己压力，熟能生巧。
  
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  不能这样说哦，污染是可以尽量避免的 虽然不是绝对 我们实验室就快有一年没有被污染过了
  

• vvmmoy (2014-12-04 16:14:41)

  也有可能是细胞培养液出现了问题，最近我找到一个公司有即开即用型的培养液，我用了感觉还可以，价格也适中，要不你去试试。（这个公司网站：cuturl('www.genom.com.cn')）

• whitesheep (2014-12-04 16:15:00)

  
  污染源很难找，但是只要你遵循严格的无菌操作，说实话，想污染还不容易。 我的经验是这样的。 因为使用的是II级生物安全柜，所以也没有布置无菌室，我们就穿平时的工作服，但是要保持实验室的清洁是很重要的。操作前用新洁而灭认真擦一遍工作台，把要用的东西放上去，开紫外15min，关紫外后，吹风20min，这样子对操作者的身体危害可以减少。 吸管装在布套中，布套可分为几格，卷起后包上牛皮纸，15P 30min,尽量做到每次使用前都灭菌，我都是每次灭几套。橡皮塞装在饭盒中，灭菌和吸管一样。枪头盒子包上牛皮纸，8P 30min。这些灭菌后都应放在37度的烘房中烘干，有水的话就容易染菌。 枪在使用前用酒精棉擦拭枪头部分，酒精棉挤的干一点，买个枪架子，会方便的多。千万不要把枪的枪头部分朝上，容易污染。 取出吸管时，手不要碰到旁边的吸管，也不要碰到包吸管的布的里侧，烧一下吸管的尾部，插上吸球，吸培养基到细胞瓶时，如果碰到细胞瓶的瓶口，（碰到其他东西也要换）一定要换吸管。 打开培养基时，烧一下瓶口，不然污染了就心痛了。手不要经过开口的容器上方。 实验做完了就要及时清理桌面，用新洁而灭擦一遍。 目前想到的就这些了。

• 831226 (2014-12-04 16:15:17)

  我培养的细胞曾经有多皿出现过真菌污染，后来听取他人意见，我把培养箱彻底用酒精消毒，然后在培养箱的底下的水槽中放上500毫升高压过饱和硫酸铜溶液以后在也没有出现过此中情况。无菌操作也很重要，只要严格的执行操作原则，我觉得问题不大。抗生素尽管可能只起安慰作用，但还是加一点好。
  

• zhy平平 (2014-12-04 16:15:30)

  
  你还应该注意所用培养液的无菌。。。
  

• wawa (2014-12-04 16:15:50)

  请问培养箱应如何消毒,多久清洁一次?

• koook5695 (2014-12-04 16:16:08)

  
  可以用新洁而灭水溶液擦洗，我不算勤快，但是一个月擦一次总是要的。

• bongte (2014-12-04 16:16:26)

  
  以我的经验平时注意一些关键地方就可以避免污染，不需要太紧张，操作越简洁细胞在外停留的时间越短越不容易污染，否则再仔细小心也说不定会染菌。 一旦污染，就要将所有用过的瓶皿管等彻底严格的清洗消毒灭菌，如果可以更换就更好。培养箱也要清洗和消毒。另外，您说同组其他人没有问题，那你需要比较一下你们的主要差别在那里，如你的培养液和血清可能也都要更换，不要吝啬。 另外，器皿未使用一周以上最好要重新灭菌。滴管头部碰瓶口后果下火就可以，但不可少太久。祝你顺利。