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着色剂——薄层色谱法（三）
关键词：熔点标准物质 食品添加剂检测 农药标准物质 水质检测标准样品着色剂——薄层色谱法（三）
4．吸附分离
称取聚酰胺粉0．5～1 g于小烧杯中，加少量水调成糊状，水浴上加热至70℃的处理后的样品液中，充分搅拌，使色素完全被吸附，如聚酰胺粉不足可补加。将聚酰胺沉淀物全部移入G3耐酸漏斗中，抽滤，用20％柠檬酸酸化至pH为4的70℃水反复洗涤。每次约20 mL，边洗边搅拌，若含天然色素，再用甲醇一甲酸溶液洗涤1～3次，每次约20 mL，至洗液无色为止。用70℃水再多次洗涤至洗液与原水pH相同为止。洗涤过程中必须充分搅拌，再用乙醇一氨溶液，分次解吸全部色素，收集全部解吸液，用20％柠檬酸溶液调节至pH为6。(若用分光光度法测定，则用pH为6的蒸馏水定容至50 mL；若用薄层色谱测定则将原液置水浴上浓缩至约2 mL后移人5 mL容量瓶中，用50％乙醇洗涤容器，洗液并人容量瓶中并稀择至刻度)
5．测定
①薄层板制备：取聚酰胺粉1．6 g，加0．4 g可溶性淀粉，加2 g硅胶G于研钵中，加15 mL水，充分研匀，涂布于玻板，厚0．3 mm，室温晾干后，于80℃烘箱中干燥1 h，取出置于干燥器中备用。
②点样：离板底端2 cm处，将标准液2µL与样品液0．3～0．4 mL，从左到右点成与底边平行的带状，线条宽度要求在2 mm内，待吹干后进行展层。
③展层：苋菜红、胭脂红用f展开剂；亮蓝、靛蓝用i展开剂……展层缸与薄层板先用相应的溶剂系统饱和30 min，用上行法展开，薄板下端浸入溶剂0．5～1 cm，待分离的色素已明显分开(约2～3 h)，即可取出凉干。然后，与标准斑比较定性，如果比移值(Rf)相同，即为同一着色剂。
④比色定量：将展开凉干后的色斑用刮刀刮下，包括扩散部分，分别用粉粒收集器收集，用丙酮一氨溶液(或乙醇一氨溶液)解吸色素液，直至收集器中的吸附剂变白为止，解吸液用20％的柠檬酸调至pH为6，定容10 mL留待比色用。用1 cm的比色皿，在分光光度计上，相应的波长下测吸光度。同时做标准曲线。从标准系列(曲线)中即可查得样品中色素含量。同时做空白。
[标准曲线的绘制：分别取0．0 mL、0．5 mL、1．0 mL、2．0 mL、3．0 mL、4．0 mL胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄等标准使用溶液，或0．0 mL、0．2 mL、0．4 mL、0．6 mL、0．8 mL、1．0 mL亮蓝、靛蓝色素等标准使用溶液，分别置于10 mL容量瓶中，用20％的柠檬酸调至pH为6，定容。用1 cm的比色皿，在分光光度计上，相应的波长下(所选的A一值，表15—2可参考)测吸光度。分别绘制标准曲线。]
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着色剂——薄层色谱法（三）
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