【求助】有人作过免疫共沉淀结合2D吗

最新回复

• windy+++ (2014-4-16 15:45:43)

  
  我猜想LZ的意思是说把这些共沉淀的蛋白复合体重新变性成单蛋白,然后跑2-DE.

• utt0989 (2014-4-16 15:46:24)

  
  免疫共沉淀结合2D比较简单了，免疫沉淀后加2D上样叶把蛋白变性，直接作2D就可以了，没有什么难度。因为免疫沉淀杂质，盐分都比较少，所以比、细胞组织裂解液作2D容易成功。

• tuuu2 (2014-4-16 15:46:59)

  免疫共沉淀结合2D比较简单了，免疫沉淀后加2D上样叶把蛋白变性，直接作2D就可以了，没有什么难度。因为免疫沉淀杂质，盐分都比较少，所以比、细胞组织裂解液作2D容易成功。
  
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  没那么理想D

• xyw5 (2014-4-16 15:48:27)

  
  主要问题存在于你使用抗体后，结合蛋白洗脱的方法：
  1、如果使用常规洗液，盐分含量太高，需要进一步除盐；
  2、如果使用裂解液直接洗脱，抗体轻链也会被洗脱下来，占有很高的丰度，影响聚焦。

• remenb (2014-4-16 15:48:53)

  beads 粘的非特异蛋白怎么办

• hold住 (2014-4-16 15:52:24)

  
  呵呵，难道做实验会没有对照组吗?实验都要有对照组，这是进行科学研究最最基本的概念。
  如果方法可行，那么实验组和对照组两块胶进行差异分析，从理论上讲就可以去除非特异性结合的蛋白。

• any333 (2014-4-16 15:52:48)

  QUOTE:

  原帖由 hold住 于 2014-4-16 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  呵呵，难道做实验会没有对照组吗?实验都要有对照组，这是进行科学研究最最基本的概念。
  如果方法可行，那么实验组和对照组两块胶进行差异分析，从理论上讲就可以去除非特异性结合的蛋白。 ...

  恩，理论上可以去除非特异结合蛋白的影响。