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【求助】关于TNF-a检测
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刚开始做这个方面的实验，想检测细胞上清中TNF－a的含量，除了采用ELISA，是不是可以用western blot 检测呢，因为实验不需要准确定量，只要有变化趋势就ok，而且进口的ELISA的盒子比较贵，不知道有没有做这个方面的高手，来指教一下啊，谢了。在做wb的过程中有没有什么需要注意的呢？
P.S 不知道有没有关于上清中的细胞因子用WB检测的文献呢，发几个来参考一下吧。
//BOW
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最新回复
greenbee (2013-12-11 15:13:21)
应该可以的，还可以做PCR
bs4665 (2013-12-11 15:18:34)
买抗体和其他做WB的试剂也不便宜吧。
ilisa的盒子也有不到2000的，既然不需要准确定量，国产进口都一样
bananapeople (2013-12-11 15:19:49)
QUOTE:
只是拿TNF-a做一个检测指标，WB的试剂是共用的，还好吧，有没有人做过啊，告诉我个确定的答案好不？taoshengyijiu (2013-12-11 15:20:30)
没做过哦，但是可以严重的告诉你：一些TNFα Antibody 是可以用于WB的。
remenb (2013-12-11 15:20:48)
我在做，就是还没出结果！
gogo (2013-12-11 17:08:15)
it's difficult for you to detect TNF-a in the supernatant using western blot. One reason is the concentration is lower. The other reason is the M.W of tnf-a is about 17kD, it's a little small to detect using western. I suggest you that the elisa is the first choice, it's sensitive to detect only 4 pmol of TNF, and it's also easy to do.
abc816 (2013-12-11 17:08:36)
当然可以用WB了，而且不需要检测两端的抗体，只要一抗就行了，加上酶联价格应该比ELISA 便宜
bananapeople (2013-12-11 17:08:59)
我做出来了！细胞上清用了western blot 内参用了相应细胞下细胞中的内参β-actin（各个对应的来）
上清中TNF浓度是很低，所以我用了超滤浓缩管（millipore超滤浓缩管，根据17/3约=5选择超滤浓缩管），将上清液超滤浓缩了，结果就做出来了很漂亮的条带
至于文献参考，是有做上清wb的但是没有相应的上清内参，我用了细胞内内参 就是不知道会不会不被承认！
wood533 (2013-12-11 17:34:15)
这个东西跟elisa一样吧，如果eliasa不需要内参的话，上清是不是也不需要内参呢，不过还是恭喜啊，能做出来就好。
33号 (2013-12-11 17:35:03)
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