【求助】关于柱层析收集液结晶的一些疑惑，望不吝赐教

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• feima+ (2014-12-02 15:15:27)

  ①样品1g以上我会过柱，100mg左右我就跑制备板了，那么硅胶柱最小的上样量大概是多大呢？我这边最小的柱子直径是1cm左右
  ②有些收集液放置一晚或者更长时间，挥发掉部分溶剂后析出晶体，听师兄说只要将其过滤，拿多种溶剂冲洗就能得到纯的化合物了，结晶是因为溶剂挥发溶液过饱和，那怎么知道它析出的是单一化合物还是混合物呢？
  ③俩瓶相邻组分析出的晶体有没有可能是俩种不同的化合物？
  ④具体拿什么溶剂洗，有没有什么原则可以参考？
  柱子直径是1cm,可以分离30mg的样品，我分过20mg的，
  是单一化合物还是混合物，爬个板就OK,
  俩瓶相邻组分析出的晶体有可能是俩种不同的化合物，也有可能是同一化合物
  具体拿什么溶剂洗要根据化合物的性质，就是用对样品溶解小对杂质溶解大的溶剂
  

• gmjghh (2014-12-02 15:15:49)

  谢谢，那请问为什么要用抽洗呢？另外固体很难溶解啊，做核磁都直接拿DMSO溶的，可TLC不能用DMSO溶啊.

• zwsyrt (2014-12-02 15:16:13)

  QUOTE:

  原帖由 gmjghh 于 2014-12-2 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  谢谢，那请问为什么要用抽洗呢？另外固体很难溶解啊，做核磁都直接拿DMSO溶的，可TLC不能用DMSO溶啊.

  杂质也很难溶解吗？ 抽洗可以很快去除杂质的。

• gmjghh (2014-12-02 15:16:35)

  QUOTE:

  原帖由 feima+ 于 2014-12-2 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  ①样品1g以上我会过柱，100mg左右我就跑制备板了，那么硅胶柱最小的上样量大概是多大呢？我这边最小的柱子直径是1cm左右
  ②有些收集液放置一晚或者更长时间，挥发掉部分溶剂后析出晶体，听师兄说只要将其过滤，拿多种溶剂冲洗就 ...

  谢谢你~
  ①20mg样品过柱子也是干法装柱干法上样吗？如果是干法上样，那得用多少硅胶拌样呢？不会也用20mg吧？
  ②结晶出来的东西一般都难溶或者微溶，如果要点板那要用大量溶剂去溶解咯？
  ④某种溶剂对样品的溶解度大小我们也只能从洗的过程中去观察吧？
  

• bgf5 (2014-12-02 15:16:56)

  1.拌样用硅胶要根据具体化合物的溶解性
  2.不爬板也可以，有条件直接打谱
  4.如是未知物只能从洗的过程中去观察

• gmjghh (2014-12-02 15:17:17)

  QUOTE:

  原帖由 bgf5 于 2014-12-2 15:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  1.拌样用硅胶要根据具体化合物的溶解性
  2.不爬板也可以，有条件直接打谱
  4.如是未知物只能从洗的过程中去观察

  谢谢
  ①溶解性好的话拌样硅胶可以少加些？请问你过20mg样品那次是什么情况呢？
  

• dragonkilly (2014-12-02 15:17:36)

  2楼回答的不错，我想补充的是，洗固体我这用的是抽洗。结晶的固体先不管是不是纯的，关键是固体，应该比液体纯吧。分离每个步骤只要能使样品得到富集，这步就不白做。先拿出来在说。然后用抽洗（不知道你看懂这个概念不洗液瞬间接触样品的表面，然后被抽走），固体用TLC 、hplc 看看纯度。决定下部怎么做。
  

• redbutterfly (2014-12-02 15:18:00)

  QUOTE:

  原帖由 gmjghh 于 2014-12-2 15:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  谢谢你~
  ①20mg样品过柱子也是干法装柱干法上样吗？如果是干法上样，那得用多少硅胶拌样呢？不会也用20mg吧？
  ②结晶出来的东西一般都难溶或者微溶，如果要点板那要用大量溶剂去溶解咯？
  ④某种溶剂对样品的溶解度大小我们也只 ...

  20mg 里面是不是含有色素等物质，上个凝胶柱吧。去点色素。硅胶有死吸附的。
  

• gmjghh (2014-12-02 15:18:28)

  QUOTE:

  原帖由 dragonkilly 于 2014-12-2 15:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  2楼回答的不错，我想补充的是，洗固体我这用的是抽洗。结晶的固体先不管是不是纯的，关键是固体，应该比液体纯吧。分离每个步骤只要能使样品得到富集，这步就不白做。先拿出来在说。然后用抽洗（不知道你看懂这个概念不洗液瞬间 ...

  谢谢，那请问为什么要用抽洗呢？另外固体很难溶解啊，做核磁都直接拿DMSO溶的，可TLC不能用DMSO溶啊

• nut6694 (2014-12-02 15:18:54)

  1.硅胶的上样量，我做少的一次是400mg左右。具体情况我一般是根据样品跑板的结果来看。点多，颜色又不同，我就过凝胶了。2.过滤，用多种溶剂洗，我用过，可以得到单体，但很耗时间。如果判断是否是单一晶体，只要点样，跑两三个系统还是一个点的话，就可以确定是单一晶体了。3.这儿应该有可能吧。做分离，他们都说一定要仔细吧。万事都有可能。哈哈  共勉。

• gmjghh (2014-12-02 15:23:04)

  QUOTE:

  原帖由 nut6694 于 2014-12-2 15:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  1.硅胶的上样量，我做少的一次是400mg左右。具体情况我一般是根据样品跑板的结果来看。点多，颜色又不同，我就过凝胶了。2.过滤，用多种溶剂洗，我用过，可以得到单体，但很耗时间。如果判断是否是单一晶体，只要点样，跑两三个系统还 ...

  哦，有道理

• gmjghh (2014-12-02 15:23:25)

  20mg 里面是不是含有色素等物质，上个凝胶柱吧。去点色素。硅胶有死吸附的。...
  
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  目前只用过硅胶和大孔树脂凝胶柱不太熟悉

• gmjghh (2014-12-02 15:23:45)

  QUOTE:

  原帖由 nut6694 于 2014-12-2 15:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  1.硅胶的上样量，我做少的一次是400mg左右。具体情况我一般是根据样品跑板的结果来看。点多，颜色又不同，我就过凝胶了。2.过滤，用多种溶剂洗，我用过，可以得到单体，但很耗时间。如果判断是否是单一晶体，只要点样，跑两三个系统还 ...

  谢谢层主
  1.那颜色不同是说在254nm还是365nm下颜色不同呀？
  2.我还是直接打核磁鉴定算了，晶体很难溶解的，而且转移过程中还会损失，有时候量也不多
  3.嗯，只是分的心很累，老是不够纯...

• gmjghh (2014-12-02 15:24:08)

  谢谢
  ①溶解性好的话拌样硅胶可以少加些？请问你过20mg样品那次是什么情况呢？...
  
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  是的溶解性好的话拌样硅胶可以少加些。我过20mg样品那次是纯化样品后做液质