【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解

最新回复

• mickeylin (2013-7-17 11:31:23)

  
  我昨天做了一次电泳，发现下方总有一条红色的线，随着电泳进行而前进，很像楼主图上下面那条线，不知道是不是也漏胶

• DNA (2013-7-17 11:32:07)

  感觉还是胶的问题，胶和玻璃板、浓缩胶和分离胶之间都有空隙。
  玻璃板是不是夹得太紧了啊，这样拔梳子的时候容易出这样的问题
  还有就是胶配好后放冰箱也容易出这样的问题

• 131415 (2013-7-17 11:32:29)

  
  电泳装置是BIO-RaD的，还凑合。
  
  凝胶是放在28度温箱中，从未放冰箱。

• www.1 (2013-7-17 11:32:49)

  
  感觉是在胶与板之间漏出来的，是不是浓缩胶配得不好？或者是楔子没插紧，胶板里面进空气了

• 131415 (2013-7-17 11:34:17)

  
  不是漏在胶与板之间。
  
  因为脱色后发现空白泳道也出现了蛋白。纯化的单一条带的蛋白也出现了杂带。
  
  苦恼中..........................

• duoduo (2013-7-17 11:36:18)

  
  是所有的泳道出现同样的杂带吗？电泳缓冲液污染了没有？空白泳道也出现条带，一般要么是别的孔上样时溢孔了，要么是电泳缓冲液污染了，缓冲液母液、容器、电泳槽都仔细检查看看。

• 131415 (2013-7-19 09:46:01)

  每次电泳缓冲液都现用现配，一次性使用。电泳槽，都用去离子水冲洗。
  
  关键是“漏样”这个现象怎么解释？！！

• 箭头儿 (2013-7-19 09:48:31)

  样品是什么？也有可能是样品的问题

• 131415 (2013-7-19 09:49:01)

  QUOTE:

  原帖由 箭头儿 于 2013-7-19 09:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  样品是什么？也有可能是样品的问题

  大肠杆菌表达的蛋白

• 大尾巴 (2013-7-19 09:49:20)

  
  我还是倾向于认为是胶和玻璃板之间脱了。左数第六泳道很明显

• 987789 (2013-7-19 09:50:16)

  泳装置是BIO-RaD的，还凑合。
  
  凝胶是放在28度温箱中，从未放冰箱。
  
  ============
  
  放了几天了呀

• 131415 (2013-7-19 09:52:01)

  
  做完胶放置各放置40分钟。
  
  漏样就某一个泳道漏。 有时出现2个泳道。为不确定性。

• 987789 (2013-7-19 09:54:30)

  
  大哥，小弟最近也是出现这个问题，我一直怀疑是配胶的问题，换了所有试剂也是一样，我用的电泳仪也是和你一样，我现在怀疑是不是样品中的盐的浓度太高？请问你左数第六个样品是什么？
  
  同时强烈有经验的高手给我们解答，谢谢

• fsdd817 (2013-7-19 09:54:53)

  
  发现了吗？上样孔下面有一条线，算得上很直吧，请问这是浓缩胶和分离胶的结合点吗？
  如果是：我觉得是第六道漏下来的，说明浓缩胶有问题，或者说这个孔道的样品不适合你做的浓缩胶，建议你用别人的实验室的设备试试，各种溶液也用别人的，因为我担心是你买的试剂就有问题，还有，你也可以试试不用浓缩胶，全配分离胶来跑（我这边有人经常这么跑），因为你的分离胶不漏样。
  如果不是：可能是配胶手法问题，建议让别人配一块浓一点的胶试试，其实我做电泳也4年了，还真没遇到因为样品的成分而造成漏样的问题，还是觉得是胶的问题。
  -------本人拙见

• 131415 (2013-7-19 09:55:23)

  
  换了师弟做一样的问题，换了一个师妹，也是这样的问题。

• avi317 (2013-7-19 09:55:49)

  
  是不是上样量加的太多了，漏出来的是上样缓冲液

• 131415 (2013-7-19 09:56:18)

  
  因为脱色后发现空白泳道也出现了蛋白。纯化的单一条带的蛋白也出现了杂带。

• 831226 (2013-7-19 09:56:52)

  我也有你这样的现象。。。不过每次电泳之后都没有影响。。。所以我也没有仔细的去想过。因为我一直是用水封住分离胶的。用移液器吸去上面的水之后再用滤纸吸干。不过总是觉得胶面之间结合得不是很紧密。以前做胶觉得没有出现过这样的情况。因为制胶器近来被人用的一塌糊涂，所以我觉得是制胶的问题。至于说是盐浓度过高的话，我跑的多半都是菌液，也没那么高的盐浓度吧。
  觉得如楼上几位所说到的，在图下方有一条水平的线，应该是分离胶和浓缩胶的分界线。但是也看出来你的胶左边怎么有两个凸起呢？

• 66+77 (2013-7-19 09:57:52)

  电泳槽什么的也换换吧，我原来的时候，电泳也遇到过问题，就拿到别的实验室，找熟人帮个忙

• 66+77 (2013-7-19 09:58:38)

  
  再提高一下胶的浓度，我做胶是用异丙醇来压平，压平后一定要尽量吸干，浓缩胶既要充分混匀又要讲究迅速，这一点不太好掌握，浓缩胶加完后晾干的时间长一点，不要放入冰箱，拔梳子时要轻一些，再试试吧
  而且，有杂带要是不是非常过分，也不至于影响视觉鉴定吧