告别繁琐紧张的移液工作

2010-2-04 00:34 来源: Eppendorf
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告别繁琐紧张的移液工作-eppendorf高通量PCR自动移液工作站简介

  PCR反应样品的准备和加样过程在整个PCR反应中是非常重要的操作。手工加样操作很难保证每孔加样的准确性和精确性。只有自动化的加样工作站才能确保微量加样的可靠性。

  20年前,Kary Mullis 发明了聚合酶链反应(PCR),在生命科学研究和医药多个应用领域引起了重大的变革。从那时起,这种DNA复制新技术就不断在发展。 最新的例子,就是应用到重症急性呼吸道综合症(SARS)的检测。借助聚合酶链反应,准确无误地检测到冠状病毒病原体。PCR 反应特征需要特殊的条件和技巧。实际工作中,PCR可以扩增10~100个DNA分子,这种高灵敏性和特异性的PCR具有很高的应用价值。PCR反应样品的准备和加样过程在整个PCR反应中是非常重要的操作。手工加样操作很难保证每孔加样的准确性和精确性。特别是384孔板孔间的距离只有4.5mm,因此对加样者的熟练度要求非常高。只有自动化的加样工作站才能确保如此微量加样的可靠性。

  告别繁琐紧张的移液工作

  许多分子生物学方法实现了自动化,自动化的领域仍在不断扩大,已经开始替代传统的手工操作方法。

  Eppendorf的移液工作站epMotion® 5070用于实时定量PCR(qPCR)体系与手工方法的qPCR体系进行比较。移液工作站epMotion 5070参与的操作包括标准的梯度稀释、一系列转移液体,以及加样到反应孔等等。

  为扩增特异性靶基因,并检测出扩增信号,将使用Eppendorf的RealMasterMix Probe试剂,它是唯一经过优化的、用于水解探针为检测原理的qPCR,其特点是自有专利的HotMaster® TaqDNA聚合酶适合常温下的PCR反应建立。

  使用两个qPCR平台:ABI Prism 7000SD(Applied Biosystem,Foster City,CA,USA)和Bio-Rad iCycler iQ(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)。

  简而言之,用Eppendorf自动移液工作站epMotion® 5070参与的实时qPCR系统,与手工方法的PCR相比较,手工操作的常见缺陷可以减少,同时提高可重复性和准确性,以及全面减少污染的可能性。

  轻松完成加样工作

  经常用 96 孔或者 384 孔板做 PCR 实验,或者经常处理酶标板的工作者,一定体会到,做此类试验需要注意力高度集中。时间长了,感觉精疲力尽。在操作此类试验时,经常发生一些失误。比如,换完吸嘴后,忘记了第 23 栏孔是否已经加好引物?从而不知道是从 22 栏开始,还是从23栏开始?有了epMotion 5070 小型自动加样工作站,就不会再出现诸如此类的问题。在短短的7min里,就可以将实验需要的试剂,如 HotMasterMix,分子生物学级别的纯净水,或者 96 种不同的样品等加入到96孔板。如果是384孔板,可能需要 21min,这是因为epMotion5070 是一台小型的加样工作站。假如是将同一种样品分到 96 孔,整个过程只需2 min!

  完美组合

  自动加样工作站可以应付所有的重复加样工作,这是毫无疑问的。如果配合 Eppendorf 其他产品如试剂和耗材,即可为 PCR 实验提供一个完美的实验条件。如采用 Eppendorf的HotMasterMix 即用型试剂盒作热启动的 PCR 反应,这种情况非常适合自动加样工作站处理。因为 HotMaster 热启动酶可以储存在普通的冰箱中,无需事先解冻,而且该试剂盒可以长时间置于工作台中,无需冷却。其热启动性能特征防止酶与其他成分的预反应。原因是 HotMaster 试剂盒有专利的HotStart / Cold Stop技术,可以在整个PCR 循环过程中达到热启动/冷终止的效果。有别于其他传统的热启动试剂盒。而其他品牌的热启动酶,经 95℃孵育激活后,不能恢复低温时阻断 Taq聚合酶的功能。而且使用该试剂盒,无需摸索合适的镁离子浓度,因为MasterMix 的缓冲液系统具有自我调节镁离子浓度的功能,可以适合各种PCR的反应条件。

  96,384 twin.tec PCR 板尤其适合自动加样系统,符合SDS 标准。twin.tecPCR 板的边缘是聚碳酸酯材质,薄壁孔壁是聚丙烯材质。这样的材质和制作工艺,可耐受高温和机械的压力,实验偏差小。

  自动加样对吸嘴的材质和形状要求很高。epMotion 专用的吸嘴 epT.I.P.S放置于无污染的吸嘴盒,且分为优质级和 PCR 洁净级两种不同纯度的吸嘴套装。根据实验需要,还可以选择有滤芯和无滤芯的吸嘴。

  不再乏味

  最值得庆幸的是,无需担心加样重复性,也不用再为忘记加样次序的问题烦恼。从此这种乏味的,但又必须不断重复的工作,交给 epMotion 了,不仅自动化程度高,而且结果可靠。