【求助】内参可以做出来，目的蛋白总是白板

最新回复

• avi317 (2013-12-09 16:21:42)

  
  做出免疫组化也不能保证抗体好的，很可能是假阳性的，能否说明下抗体的名称和产商，大家好帮你分析，估计原因抗体不好，如果你确定你的实验操作没有问题的话

• tie8 (2013-12-09 16:22:04)

  
  我也遇到过这种情况，请高手指点下。
  抗体有可能有问题，目的蛋白确定转到膜上了吗？

• avi317 (2013-12-09 16:22:47)

  做免疫组化和WB是两个不同的实验，原因有
  
  1.抗体质量是好的：
  
  抗体可能只能用于IHC，不能识别变性的WB中抗原
  
  2.抗体质量是不好的
  
  做出来的IHC是假阳性，一试WB就露馅了，不能用啊
  
  3.抗体质量是好的
  
  能够做出来WB和ihc，是研究者实验设计和样品的问题咯

• huifeng0516 (2013-12-09 16:24:07)

  
  在确定抗体无误的前提下，一抗杂交的时间以及浓度也很重要，如果目标蛋白表达比较低的话，再摸摸条件吧。

• plaa (2013-12-09 16:27:20)

  
  目的蛋白含量太低。
  或者没有提取到目的抗原。
  抗体质量不好。

• abc816 (2013-12-09 16:28:52)

  
  相关疾病：
  胃癌
  我是做检测14-3-3蛋白两个亚型θ和ζ在胃癌组织和非胃癌组织中表达，看是否有差异趋势。现在14-3-3蛋白亚型θ在胃癌组织和非胃癌组织中表达已做出来。现在内参做出很明显，但目的14-3-3蛋白亚型ζ后来做出，但条带很淡很淡，看趋势根本就看不出来。一抗是santa crunz 公司的，兔抗人的，一抗稀释1：50——1:500，我现在是用到最高浓度1:50 才做出很淡很淡的条带，以前用1:100什么都没有。蛋白是从组织中提取的，今年7月份提的。问题到底在哪啊？希望你们能帮帮我

• mimili_901 (2013-12-09 16:29:28)

  一抗质量看看有没有问题 适合做组化的未必适合做WB

• wu11998866 (2013-12-09 16:29:50)

  
  WB 用的抗体是测线性表位，IHC用的抗体测得是空间表位。
  要看抗体说明书上适合的试验是哪个哦。

• cocacola (2013-12-09 16:30:54)

  本人也曾遇到过类似问题，内参做出来很好，抗体也没问题，目的蛋白就是做不出来，结果用免疫沉淀富集目的蛋白后再SDS-PAGE，结果目的蛋白出来了，而且各组差异很明显，这也反证了是样品中的目的蛋白过少而做不出的原因。

• redbutterfly (2013-12-09 16:52:57)

  有可能抗体质量不好，你可借用别人用着好用的抗体试试。
  或者是目的蛋白表达量太低，可以采取一下措施：提高蛋白上样量，增加抗体浓度，增加与抗体的孵育时间。
  也要注意二抗也要好用才行。