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【求助】新手请求各位老师分析一下跑出来的怪异峰形
本人是一名液相新手,最近才开始学习使用HPLC,之前实验室都是用液相简单的跑一下乙醇,糖类,而我这次需要测的东西是NADH,中文全名为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,即常说的还原型辅酶Ⅰ,查阅了许多文献,根据其中的一篇文献资料进行重复试验. 该文献的色谱分析条件为: 柱条件:Agilent1200series,columnstable-C18(250minx4.6mm)柱。 梯度洗脱条件:0min100%bufferA;10min50%bufferA;11min100%bufferA;15min100%bufferA。 流速1.0mL/min, 检测波长:254nm,340nm。 柱温:35℃。 bufferA:PH7.0 PBS(磷酸钾缓冲液) 本人所用柱子为inertsil OS-SP(C18)(150minx4.6mm)柱 用标准样品跑了一张如图,大约9min的时候出峰……如图所示 之后提取了酵母胞内的NADH跑了几次,出现的峰非常诡异,从9min开始,基线都开始不稳了……求各位老师分析下,需要改进什么,新手虚心请教!谢谢! 【求助】新手请求各位老师分析一下跑出来的怪异峰形
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最新回复
gogo (2015-2-02 17:28:19)
既然标准品正常,问题很可能出现在样品上。
样品处理最好改进一下
minran_1980 (2015-2-02 17:28:41)
vera+ (2015-2-02 17:29:13)
标准品基线也不是很稳啊,可能流动相也需要改变一下,你的样品处理的干净吗?是不是有在主峰后面出峰的杂质呢,如果是,该条件分不开他们的话就会出现基线一直不稳定的情况,你再看看是什么原因
memory (2015-2-02 17:36:50)
羊咩咩 (2015-2-02 17:37:22)
样品成分可能是很复杂,NADH浓度可能也比较低,除了富集样品外,在梯度方面可以作何改动.
羊咩咩 (2015-2-02 17:37:42)
可能主要的问题在样品提取步骤上。
您的样品是如何制备的?
any333 (2015-2-02 17:38:58)
minran_1980 (2015-2-02 17:39:37)
hyuu (2015-2-02 17:40:05)
柱子短了?还没保留好就走了出来
tieshazhang (2015-2-02 17:41:11)
你所参考的文献资料有没有标准色谱图,你可以将你跑的标准图和文献的标准图进行比较,如果一致的话就证明你的仪器和色谱分析条件是没有问题的,那就需要对你的样品提纯条件进行改进,你采用的提纯条件也是那篇文献上的么?建议你再针对你所提取的物质查一查另外的提纯方法。个人认为你的标准品跑得挺好的,问题应该还是出在提纯步骤上,应该是杂质干扰造成基线不能回归零点
yysr238 (2015-2-02 17:41:30)
xue258 (2015-2-02 17:42:04)
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