【求助】C18柱用稀硫酸清洗

最新回复

• jude (2015-8-26 16:54:47)

  我听说的是硝酸。
  

• milkdog (2015-8-26 16:55:06)

  没用过。不怕产生沉淀颗粒？

• cj_mondy (2015-8-26 16:55:26)

  发酵液带了的柱压高，一般情况都是发酵液中的有机物影响的。用10%异丙醇处理比较好。

• vcve (2015-8-26 16:57:20)

  要是遇一重金属离子，那可就沉淀了哈

• youyou99 (2015-8-26 16:58:35)

  那怎么办呀，异丙醇处理过了，没有效果，压力还是挺大的。

• veiwu (2015-8-26 16:58:51)

  是硝酸还是硫酸啊？第一次听说硫酸哎。

• bs4665 (2015-8-26 17:00:21)

  《实用色谱技术问答》（中国色谱网组织编写，刘虎威主编 化学工业出版社 2009年1月第一版第一次印刷）
  
  100页  有这么一段话
  
  “注意：0.05mol/L的稀硫酸可以用来清洗严重污染的色谱柱。”
  
  101页  另有
  
  “如果简单的有机溶剂/水的处理不能完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05mol/L的稀硫酸冲洗非常有效。”
  

• H2O (2015-8-26 17:02:54)

  后来有用这样用过吗？我也看到这样的清洗方式，不过不敢随意用冲洗，不知道会不会对系统本身有没有影响或者腐蚀之类的。
  

• kewanqi2011 (2015-8-26 17:03:28)

  肯定有赛，搞不好你的柱子就报废了，不过实在不行也只有死马当活马医

• finger (2015-8-26 17:03:54)

  
  好怕怕啊！一般C18柱耐受pH范围都不能小于2啊，据说是小于2键合相会水解，这0.05M硫酸啊！

• veiwu (2015-8-26 17:04:16)

  在确定冲洗色谱柱的方法之前，首先要分析一下可能的污染物是什么？盲目套用一些“经典”色谱柱清洗方法，只会浪费时间浪费金钱。
  色谱分析，没有一成不变的使用方法，同样也没有一成不变的的清洗方法。
    
  切入正题：
    
  样品是发酵液，那么，可能会含有蛋白、多肽、多糖等高分子成分（未发酵完全的物质和酵母菌的分泌物、甚至是酵母菌本身等，我不是学生物出身，所以这一点不是非常肯定）；对色谱分析来说，特别是反相HPLC，蛋白是很容易吸附在C18上的，导致色谱柱柱头污染，柱压升高，出现肩峰，峰分差等现象……
  冲洗蛋白最好的试剂是TFA，你可以用0.1%TFA水和0.1%TFA MeCN跑梯度：从80:20比例60min到20:80，保持30min，流速1ml/min，然后用H2O：MeCN（95:5）20倍柱体积把TFA清洗干净。
    
  不幸的是，0.1%TFA水溶液的pH<2(大约1.7)，所以清洗过程中有可能对普通的色谱柱造成伤害，但并不严重。而且，有些强吸附性蛋白很难从柱头快速通过整个色谱柱而被冲出来。某些公司的色谱柱可以反冲，这些色谱柱直接反冲效果会更好。
    
  所以，最好的办法是避免这种事情发生。可采取的措施，一是在样品前处理上做文章，尽可能除去蛋白等污染物；二是使用保护柱，切记保护柱改换的时候就要换，否则起不到保护作用，并建议实验结束后把保护柱拆下来，分别清洗色谱柱和保护柱（这个你懂的！）。