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【求助】急求高分子量蛋白的聚焦条件
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肿瘤
我的样品是肿瘤组织,目标蛋白的分子量在200KD左右,用2D做了几次,高分子量区域都没有点,不知道原因在哪,很郁闷,请各位前辈帮帮忙!我想请教一下聚焦条件,还有分高分子量蛋白的技巧,万分感激!!!
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【求助】急求高分子量蛋白的聚焦条件
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-3-23 23:12 作者: dmg 来源: 分析测试百科网
最新回复
gogo (2014-3-23 23:12:58)
BUK (2014-3-23 23:13:25)
你主动水化上样看一下.怎样?
cocacola (2014-3-23 23:13:42)
rxcc33 (2014-3-23 23:13:59)
gogo (2014-3-23 23:14:17)
采用主动水化,以可能牺牲部分小分子蛋白为代价,可以稍微延长点低电压水化时间。
另外二相方面也是一样,增加电泳时间,使高分子量的区域分辨率更高,并且配相对低浓度的PAGE胶,如8%-10%,就是最后染色的时候可能不方便操作。
这纯粹是我自己的理解,并不一定正确。
dmg (2014-3-23 23:14:36)
谢谢大家的帮助,我就是采取的主动水化,而且水化时间都是18小时,不知道是不是还是少,可是聚焦时间的延长,会不会影响DTT发挥作用啊?
gogo (2014-3-23 23:14:54)
会的,时间长了DTT就失效了,可以在阴极端滴加20mM DTT补充。
dmg (2014-3-23 23:15:16)
谢谢,我还想知道怎么在阴极加DTT呢,因为胶上有矿物油覆盖啊?
dmg (2014-3-23 23:15:37)
any333 (2014-3-23 23:15:57)
有人教我是这样加DTT的
就是和加盐桥一样把20mM 浓度的DTT
加到滤纸上放到阴极胶条和电极间
但滤纸应该湿润和无明显水在表面
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