【求助】做的胶过夜行吗？

最新回复

• zsxan1990 (2014-3-08 16:09:02)

  
  做好的胶，4℃过夜没问题。聚合过夜没试过，可能不好。
  胶凝的慢主要可能有3方面原因：
  1.试剂问题
  AP尽量用近期的（我一般用4℃保存半个月内的，没出过问题）；TEMED时间较长的，特别是有较浓的氨臭味的，可多加一些（我们实验室的TEMED有3-4年了，我一般加5-10倍文献上的量）。AP对聚合速度影响较小，可以多加一些，聚合速度和AP浓度的平方根成正比，与TEMED浓度成正比。
  缓冲液pH值，不同pH值胶聚合速度差异很大。
  2.温度
  胶在25~35℃聚合较好，温度过低胶较脆和浑浊，温度过高易造成聚合不均匀且易产生气泡。（冬天易出现不易聚合的情况，放在培养箱里聚合即可）
  3.封口
  分子氧会阻碍聚合，一般加蒸馏水或异丙醇等封口。

• xiaoxiaoniao (2014-3-08 16:09:24)

  
  聚合过夜没有问题，我们经常制备好凝胶然后放在四度冰箱保存1～3天，经过SDS-PAGE后电泳结果基本没有影响。不过要是结果要求较高的，建议还是现配现用为佳。

• xiaoxiaoniao (2014-3-08 16:10:05)

  
  另外，TEMED不能添加过多，否则凝胶形成不均匀，对实验结果影响很大，同时会增加凝胶的脆度。

• xiaoxiaoniao (2014-3-08 16:10:26)

  非常感谢，那我就不要凝胶过夜最好，不过要费时间。再问一下，AP可以多加多少呢而不影响结果呢？

• pengke1983 (2014-3-08 16:10:44)

  
  AP不用做很大的改变啊，加大TEMED就可以了。温度低时用文献上的翻倍量；温度高时用文献推荐量。我的分离胶大约20分钟凝好，浓缩胶稍长一点，要等完全凝好了再拔梳子进行后面的步骤，否则浓缩胶容易被扯出裂隙，好好的一板胶就废掉了。

• 8princess8 (2014-3-08 16:11:02)

  分离胶凝久些好，一般40min以上，这样分离效果好些！浓缩胶凝的一般快些，一般半个小时（可能还不用，但为了确保胶能凝好，宁可多等会儿）就可以了，至于胶过夜，我觉得没什么问题（不过得用保鲜膜包下放4度冰箱）；或者你可以先灌分离胶（水封多点,防止胶面干掉），然后第二天在灌浓缩胶，这都没问题。我用过放了三四天的胶，也没什么异常。

• 00无名指00 (2014-3-08 16:12:37)

  
  做的胶搁4度放几天没有问题。我们是在胶孔里加满水或者电泳缓冲液，或者干脆不拔梳子，放塑料手套里扎口。一个礼拜左右都还可以用的。不过用之前你要注意看一下分离胶和浓缩胶的交界面，放时间长了这里容易出气泡。有泡的孔就不能用了，没泡的接着用。
  当然，如果你样品比较珍贵或者要做WB检测，建议你还是最好用现配的或者配好一两天的。

• vvmmoy (2014-3-08 16:13:02)

  
  我也试过，做好的胶，4℃过夜没问题。

• zhenxin (2014-3-08 16:13:25)

  
  我们的胶都做好放塑料袋中加少量水，室温放置，第二天再用都没有问题的

• 3648755 (2014-3-08 16:13:49)

  
  我们做胶时所加的10%的AP的量一般是凝胶体积的1%，比如配10ml凝胶就加0.1ml10%AP。AP最好是新鲜的，4度保存，一个星期内用完。AP的量对聚合速度影响较小。
  TEMED的量差不多是凝胶体积的千分之一，TEMED的量对聚合速度影响较大。加多了凝聚会很快，导致胶不均匀，影响电泳结果。
  浓缩胶和分离胶一般在20-30分钟内凝固，一般不提倡胶做好了立马用，胶体内部可能还没凝固完全。可以在室温放置一段时间再用。同时若对结果要求严格我们也不提倡胶做好后在4度放置过夜。
  由于试剂和环境原因按照以上的量可能你的聚合时间会不一样，可以根据实际情况做些调整。

• 66小飞侠 (2014-3-08 16:14:26)

  
  最好不要4度过夜,SDS会结晶.
  常温下过夜就OK,我一直这么做,也没见有啥

• 莲花白 (2014-3-08 16:14:54)

  
  可以的,我们作的4度放了3天也没问题

• changlhsyo (2014-3-08 16:15:20)

  
  可以的，没啥问题的，将配好的凝胶浸泡在电泳缓冲液中4度过夜，我们现在一贯这样做，经验来看，且跑出的条带较现配现用的胶要好。你可以参考。

• BOSS2011 (2014-3-08 16:15:52)

  
  不建议常温过夜，因为有时候胶孔会干掉

• standbyme (2014-3-08 16:16:14)

  
  做好的胶（已经凝固）用保鲜膜包好，放在4度，3-4天都不会影响的。

• wsll (2014-3-08 16:16:39)

  
  我一般是把胶浸泡到电泳液中，4度过夜，第二天电泳，效果很好。记得好像哪本书上看过，这么做没什么影响。

• 49888 (2014-3-08 16:18:20)

  4度冰箱过夜，没有问题，可以用，效果没有影响

• one (2014-3-08 16:18:41)

  
  4度冰箱 没问题的 ，用过 ，做出来的结果还不错！

• whitesheep (2014-3-08 16:19:11)

  
  胶凝好后,放盛有缓冲液的电泳槽过夜没问题, 放4度过夜也没问题,不过最好用缓冲液封住胶面.

• qianqin1977 (2014-3-08 16:19:28)

  4度保存，4-5天琼脂，聚丙烯酰胺凝胶都没问题,但注意保湿.