【求助】显微镜常规制样技术的取材与固定

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• huali (2015-1-31 20:10:32)

  扫描电镜在生物医学中主要被用于观察样品的表面结构。根据扫描电镜的工作原理，要求被观察的样品干燥，并具有较高的二次信息发射率和良好的导电性、导热性。

• aaby (2015-1-31 20:11:04)

  在扫描电镜生物样品制备过程中，除表面比较坚硬的组织（如骨骼、牙齿、指甲、毛发等）和需要采用某些特殊制备技术的样品（如管道铸型等）以外，一般生物组织均需经过取材、清洗、固定、脱水、干燥及金属镀膜等基本程序处理以后，才能进行SEM观察。

• 兔子 (2015-1-31 20:11:38)

  扫描电镜观察的是样品表面的结构，在取材时要注意避免挤压损伤、避免外力对观察面的损伤和破坏，这是整个样品制备过程中的关键步骤之一。

• 双子座 (2015-1-31 20:12:17)

  1.取材前应作好准备，包括药品、器材和根据实验的目的与需要制定的取材方案等。每次取材的品种及数量不宜过多，以免延误时间，影响制样效果。
  2.取材部位要准确，相互对照的样品尽可能取同一部位。取材大小要适当，以观察表面结构为主的样品可以大一些，其直径最大不宜超过5mm，高度可在3～5mm之间；以观察内部结构为主的样品，其直径应小于2mm，高度可在3mm左右。为了提高后续步骤的效果，在满足所需观察内容的条件下，样品块以尽量小一些为宜。
  3.为了使被观察的样品更接近于活体状态，材料应尽量新鲜。取材用的刀片要锋利，同时应作好对样品观察面的标记。
  关于生物样品（主要指组织细胞）取材的具体方法，与一般透射电镜超薄切片法基本相同；组织离体前在玻璃平皿内放入冰块。冰块上放一牙科蜡板（或软塑料板），并在蜡板上滴加少量组织固定液。组织离体后，不需特殊清洗者应立即将样品放入上述蜡板固定液内，用锋利的刮脸刀片将样品修成所需大小需要清洗的样品。则经清洗以后再按上述方法修块。
  清洗
  扫描电镜的样品，对其表面的清洁度要求十分严格。在整个制样过程中，应始终注意清除覆盖于样品表面的粘液、分泌物、组织液、血液、细胞碎片及药物反应沉淀物等所造成的污染。若不将这些物质去掉，所需要的观察面就无法暴露，不仅会掩盖表面的微细结构，甚至会得出错误的结果和判断。

• aaby (2015-1-31 20:12:51)

  的很好，很有感触，我最近在做骨扫描电镜，标本取下后立刻固定了，表面很乱，看不清楚。
  扫描电镜的样品，对其表面的清洁度要求十分严格。在整个制样过程中，应始终注意清除覆盖于样品表面的粘液、分泌物、组织液、血液、细胞碎片及药物反应沉淀物等所造成的污染。若不将这些物质去掉，所需要的观察面就无法暴露，不仅会掩盖表面的微细结构，甚至会得出错误的结果和判断。