【求助】二次PCR目的带还是不亮

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-4-02 14:41 作者: 西子来源: 分析测试百科网

请教高人：
pcr条带不亮，很弱，于是做二次PCR，还是用第一次的试剂和体系，但目的带并没有增亮，还是很弱，这是为什么呀？百思不得其解，我是将第一PCR产物稀释20倍与100倍，结果都差不多，请大家指教！

vvmmoy (2015-4-02 14:41:38)

PCR总是很怪的，rp问题
pencil菲 (2015-4-02 14:42:22)

PCR真奇怪，我也老遇到问题。觉得引物最重要。楼主可试试不稀释产物的
西子 (2015-4-02 14:45:17)

不稀释产物会不会浓度太高？我会试试，谢谢！
大家帮我多分析分析吧，我已饱受折磨了。
linlinstar (2015-4-02 14:45:36)

我最近做了一个没稀释的，不过DNA体积数为原来的一半，效果比原来强
西子 (2015-4-02 14:45:52)

怎么判断假阳性啊？会不会是假阳性？
mickeylin (2015-4-02 14:46:10)

结果怎么样了？有改观吗？我也在做二次PCR，效果也不好，就有一回变亮了...
kewanqi2011 (2015-4-02 14:46:26)

我已经无语了，我P了好几天就没P出第二次的结果，郁闷的要死
一叶 (2015-4-02 14:46:47)

我最近也在为这个问题发愁，条带不亮拍不出好照片，快急死我了
铜雀 (2015-4-02 14:47:10)

我的二次p就是没有见过东西，全是白花花的哭
分子式 (2015-4-02 14:47:34)

哎，我都P了一个月了，还是没有改观，不是没有目的条带就是条带很浅，而且最怪的就是MAKER跑不开
babybabe (2015-4-02 14:47:55)

我前几天也在搞这个，你可以尝试下，降低一下退火温度，还有就是减少一些循环数等等优化下。在2次pcr的时候最好做几个浓度稀释下看看。