【求助】蛋白质电泳时LOADING BUFFER中溴酚兰移动速度...

最新回复

• skytree (2014-3-23 23:23:37)

  QUOTE:

  原帖由 vivian4123 于 2014-3-23 23:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  最近做蛋白电泳总是出现溴酚兰不能与蛋白样品同时移动的现象。溴酚兰总是提前跑出凝胶，以致我无法判断样品跑到的位置。
  我的胶是10%的，单板胶10mA跑20min不能出现蛋白样品压成一条线的现象。
  将电流调至15mA，10min溴酚 ...

  胶没有问题吗？

• bling (2014-3-23 23:23:56)

  
  应该是样品的问题吧，不知是什么样的样品？

• vivian4123 (2014-3-23 23:24:19)

  
  只能怀疑胶的问题或是电泳缓冲液的问题了。。。
  排查中。。

• vivian4123 (2014-3-23 23:24:41)

  
  先把本次实验的结果发上来 大家帮忙看看我把胶跑成这样是什么原因？

  
  39583516.jpg

• 12xunmei (2014-3-23 23:25:00)

  
  不知道你的胶是怎样制作的？制胶的过程中一定要保证充分混匀，保证胶的质地均匀，这样跑出来的条带才能均匀、整齐，溴酚兰和样品一致，还有胶的各成分比例一定要合理，跑电泳时要放到水平面上，你可以从以上几点找找原因，希望对你有用。

• sunshine039 (2014-3-23 23:25:17)

  我也出现了这样的问题，你再重新测定一下溶液的PH值，看是不是PH的问题，我的就是这么解决的

• junhun (2014-3-23 23:26:07)

  
  我也觉得可能是缓冲液的问题，我也出现过类似问题，等到溴酚兰跑出胶了，染色发现蛋白才跑了一般，换了配缓冲液的试剂就好了

• vivian4123 (2014-3-23 23:26:27)

  
  多谢高手指导。
  我再重配试试看看。
  再请教高手一下，我的电泳样品这种状况是降解了还是上样量过大？

• leifengta (2014-3-23 23:27:44)

  
  从图上看可能是上样量过大，样品不能反复冻融，这样可能会加速降解；还有保存时间有一定期限；染色时不能太深。你可以从以上几点尝试着找原因，试验的过程也是一个摸索的过程。

• chuntian1983 (2014-3-23 23:28:01)

  
  查一下配胶用的Tris的PH值
  上层胶配完后应尽快进行电泳
  蛋白样品第一次处理后煮沸5-10min
  4度或-20度存放后再次上样前仍需再次煮3min
  你的蛋白条带不清晰是不是没变性好
  哪个是Marker Merker有条带没？
  要是Marker没条带 还是应该考虑胶和电泳液的问题

• vivian4123 (2014-3-23 23:28:24)

  
  我晕第一个是marker。。。
  因为我的目的条带量很少，所以显色时间长了点。。
  因为怕冻融导致蛋白质降解丢失，所以样品准备好后就放在4度大概2天左右。
  marker是冻在-20的，现用现融的。这样也会降解？
  还有关于溴酚蓝泳动异常的问题，是浓缩胶缓冲液的PH有问题，修正后让我小师妹跑了一下，问题就解决了。谢谢各位的提示！！