【求助】 PCR出现很多杂带 咋办？

最新回复

• zhy平平 (2015-4-02 17:05:48)

  
  降低引物的量，提高退火温度

• cj_mondy (2015-4-02 17:06:12)

  提高退火温度 使用高保真的酶

• xingyi08 (2015-4-02 17:07:55)

  QUOTE:

  原帖由 cj_mondy 于 2015-4-2 17:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  提高退火温度 使用高保真的酶

  提高退火温度之后就P不出来了！什么带都没有。试过54-62度。我的Tm值是67。

• whitesheep (2015-4-02 17:09:48)

  不知道你的最终目的是干什么，其实只要P出你要的目的条带，割胶回收即可，如果觉得产量太少可以拿产物再P一次。

• bring (2015-4-02 17:10:46)

  来个梯度试试

• xue258 (2015-4-02 17:11:02)

  引物是不是不够特异？比对一下基因组，看看是不是还有其他序列是一样的
  

• S6044 (2015-4-02 17:11:27)

  
  8楼正解，这个步骤不用太纠结。

• newway (2015-4-02 17:12:08)

  梯度PCR摸索最佳条件，消除不了杂带就可以考虑换引物

• veiwu (2015-4-02 17:13:00)

  
  要是只要产物的话，切胶就可以了。

• pulala (2015-4-02 17:13:17)

  退火温度的问题，跑个梯度PCR

• yizhi (2015-4-02 17:13:44)

  想请问一下，梯度怎么做啊，谢谢

• dog002 (2015-4-02 17:14:14)

  
  引物特异性不好，可重新设计引物

• F22 (2015-4-02 17:16:29)

  以上原因都有可能  例外可能是由于template的原因  引物非特异性可以产生很多条条带  有时候template特殊的话 随便用一对引物都会p出东西来

• caihong (2015-4-02 17:16:46)

  调整引物，不够特异！

• eor (2015-4-02 17:17:22)

  很可能是引物的问题

• okhaha (2015-4-02 17:17:38)

  
  先试一下改变镁离子浓度，看结果如何，如果结果不好的话，可能就是引物有问题了。。。

• wu11998866 (2015-4-02 17:18:15)

  
  引物多长，估计是引物不够特异吧。其实可以直接回收你需要的带往下做实验，后面慢慢的优化实验条件

• JK.jon (2015-4-02 17:18:47)

  
  我觉得可以在第二个温度附近再设个梯度看看。

• luoliqiong (2015-4-02 17:20:13)

  如果采用梯度Tm值还不能得到你要的条带的话，可能就是引物设计的有问题了。

• toy (2015-4-02 17:20:30)

  楼主的杂带倒是一条条非常清楚啊 我做的就是一片拖尾