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【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义?
【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义?
据roche一位工程师说样品扩增Ct值超过33个cycle就没有意义(没有意义具体是什么概念也不明白)了,定量标准品最低浓度的也要Ct在33以上,请问大侠是否有道理?为什么?有公式可以推导么?好像很多临床样本定量结果Ct都在33以上。
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【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义?
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-7-01 22:01 作者: 黄花菜 来源: 分析测试百科网
最新回复
ha111 (2015-7-01 22:01:46)
不是33吧?
是37吧?
xuuuu (2015-7-01 22:02:05)
假如PCR的循环数是40个左右的话,CT值在33 (也就是10的三次方左右),这样低的拷贝数就很难确定是标本本身的CT或是由于污染引起的CT值(大家都知道PCR灵敏度很高,稍有点污染就扩增出来),为此,很多临床样本定量结果Ct都在33,即10的三次方,低于次则不报.
zhezhe (2015-7-01 22:02:22)
jrwyyplt (2015-7-01 22:02:38)
一般来讲,目前市面上的试剂盒都是以37为界,,对于可以定量的试剂盒来讲,如果试剂盒的灵敏度可以达到1个或10个,那么37以后为阴性,对于定性的试剂盒,由于样品的原因无法定量,所以以33为界,就是如maxlu 所说的,10的三次方,低于次医院的检测结果则不报.
dotaaa (2015-7-01 22:02:56)
我想请教大家一个问题:我在跑pcr的时候同样的条件下跑不出来内参,只能跑出目的基因,请问 我是否可以分开设置延伸温度而用相同的循环数,这样是否就不怎么影响实验结果?谢谢各位了!!
dotaaa (2015-7-01 22:03:26)
补充一下 我做的sybr green real time pcr,我目的基因引物Tm值分别为58.69和61.29,内参引物Tm值分别为62.04和62.41。我以前的pcr延伸条件是60度20秒。再次谢谢大家!
黄花菜 (2015-7-01 22:03:45)
可以将延伸温度改为61度1分钟试试。
tianmei001 (2015-7-01 22:04:05)
可以用两步法,90度15秒,61度30秒,试一试吧!
yapuyapu (2015-7-01 22:04:25)
大脑门儿儿 (2015-7-01 22:04:45)
pencil菲 (2015-7-01 22:05:04)
BUK (2015-7-01 22:05:25)
is2011 (2015-7-01 22:05:43)
个人认为只要是在标准曲线范围之内就是可信的。
当然还必须要有阴性对照,阴性对照部更有扩增,否则会很难判断是不是污染
summerxx (2015-7-01 22:06:01)
【求助】荧光定量Ct值大于33就没有意义?