【求助】问题请教：包含体蛋白如何免疫兔子？

最新回复

• bamboo16 (2014-7-03 17:39:01)

  刚看了另一位战友的帖子写得很详细，把包含体SDS-PAGE切胶纯化后就行了。
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5490092&sty=1')

• flyxx05 (2014-7-03 17:39:25)

  谢谢~不过我还有个疑问，用上面的方法如何定量蛋白呢？

• glass (2014-7-03 17:39:53)

  直接SDS－PAGE，然后用已知量的BSA剃度做参照，

• flyxx05 (2014-7-03 17:40:18)

  
  相关疾病：
  睑腺炎
  谢谢高手的指点。
  我上样的时候发现加了上样缓冲液的包涵体蛋白仍然不溶解致堵塞针眼，高手有什么好的办法吗？

• caihong (2014-7-03 17:40:37)

  
  表达后的菌体，最好洗涤一下，尽可能得到纯的包涵体沉淀，然后先磨细一点的，再用8M尿素溶，然后离心一下，上清再去加上样缓冲液

• flyxx05 (2014-7-03 17:41:03)

  
  感谢你的解答。请问加入尿素后是否对兔子会产生毒性而致死呢？

• 49888 (2014-7-03 17:41:32)

  谢谢高手的指点。
  我上样的时候发现加了上样缓冲液的包涵体蛋白仍然不溶解致堵塞针眼，高手有什么好的办法吗？
  
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  sds的溶解能力不低于尿素
  所以我估计你提到的现象是没有很好的处理 比如样品太多缓冲液态少 上样前需要离心

• 49888 (2014-7-03 17:41:50)

  感谢你的解答。请问加入尿素后是否对兔子会产生毒性而致死呢？
  
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  如果你是用切胶回收的办法 大可不必考虑尿素的危害了 含量很少

• ladyhuahua (2014-7-03 17:42:15)

  
  SDS对于抱憾体的溶解度根本不能和8,9M尿素比的，当然溶解性更好的是6M的盐酸胍。
  而且高浓度的 SDS对于动物体的毒性是很大的

• flyxx05 (2014-7-03 17:42:45)

  
  谢谢各位前辈的热心帮助。能不能讲讲切胶回收的过程啊，谢谢！

• nut6694 (2014-7-03 17:43:07)

  把大象放进冰箱分几步，呵呵
  开个玩笑
  跑完电泳，从胶两侧切一条下来，染色，然后根据你目的条带的位置，对比着切下没有染色胶里的那个位置的胶。
  然后研磨，加佐剂，再免疫！

• eric930 (2014-7-03 17:43:36)

  SDS对于抱憾体的溶解度根本不能和8,9M尿素比的，当然溶解性更好的是6M的盐酸胍。
  
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  sds的浓度如果也是8 9M呢？ 事实上sds可以溶解几乎所有的蛋白
  那么我们为什么不用sds呢
  这是因为SDS无法彻底的去除 而且不允许在制药过程中使用

• eric930 (2014-7-03 17:43:53)

  而且高浓度的 SDS对于动物体的毒性是很大的
  
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  sds是指用在电泳样品中的那些 不是要用它去做变性复兴 所以毒性问题不必考虑

• yysr238 (2014-7-03 17:44:13)

  
  能配成8，9M的SDS么？这样的试剂能用么？

• nut6694 (2014-7-03 17:44:45)

  能配成8，9M的SDS么？这样的试剂能用么？
  
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  其溶解能力强 也就用不到太高浓度 8 9M的说法 是相对尿素浓度讲的