【求助】pcr引物退火温度低时没有产物,高温就有，为什么呢

最新回复

• douding66 (2014-8-27 10:05:41)

  不一定是有多带，PCR影响因素很多。
  
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  恩，我可以理解，但是我想知道是什么因素产生了这种结果，除了退火温度其他条件都是一样的

• dream2013 (2014-8-27 10:06:12)

  
  低的退火温度下，更容易发生非特异匹配，不能形成有效扩增，所以没有产物。

• douding66 (2014-8-27 10:06:40)

  QUOTE:

  原帖由 dream2013 于 2014-8-27 10:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  低的退火温度下，更容易发生非特异匹配，不能形成有效扩增，所以没有产物。

  我知道啊，所以应该有多带啊，而不是没有带啊，而高温却有带

• dream2013 (2014-8-27 10:07:07)

  QUOTE:

  原帖由 douding66 于 2014-8-27 10:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  我知道啊，所以应该有多带啊，而不是没有带啊，而高温却有带

  不一定是有多带，PCR影响因素很多。

• ending (2014-8-27 10:18:38)

  
  会不会和荧光定量PCR类似，存在一个阈值温度，在其他温度下，产物的片段存在但，无法检测出。一旦超过了这个阈值，可以检测到了，毕竟，PCR的扩增是以指数形式表现的。

• douding66 (2014-8-27 10:20:18)

  QUOTE:

  原帖由 ending 于 2014-8-27 10:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  会不会和荧光定量PCR类似，存在一个阈值温度，在其他温度下，产物的片段存在但，无法检测出。一旦超过了这个阈值，可以检测到了，毕竟，PCR的扩增是以指数形式表现的。 ...

  恩，谢谢，有可能，pcr是什么可能都会发生的

• utt0989 (2014-8-27 10:20:55)

  
  你用的是高保真酶吗?

• pou (2014-8-27 10:21:14)

  一般情况下的原因是扩增的PCR序列中有比较强的二级结构，当温度较低的时候模板的二级结构无法打开，DNA聚合酶无法通过该二级结构完成整个片段的扩增，当温度高的时候二级结构才打开。如需进一步验证请自行查阅荧光定量PCR设计中的目标片段二级结构问题。有个软件叫mfold可以给出预测。虽然你这是DNA，但与RNA配对原理一致，属于触类旁通范围

• douding66 (2014-8-27 10:21:59)

  QUOTE:

  原帖由 utt0989 于 2014-8-27 10:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  你用的是高保真酶吗?

  不是，普通酶