【求助】做了好久的western，目的蛋白icam-1怎么也不出...

最新回复

• fei1226com (2014-4-16 16:27:03)

  
  你是否知道你的目的蛋白icam-1在你上样总蛋白中的表达丰度？

• 知了知了 (2014-4-16 16:27:22)

  
  这个我没有查到，不过我有看过其他人发表的文献有上样量在10μg、30μg以及50μg总蛋白，都可以出结果。
  我也有考虑到是表达的问题。
  请问如果是上样量低的话，会不会出现的都是背景呢？
  谢谢！

• yonger (2014-4-16 16:27:37)

  
  应该换个一抗试一试

• 知了知了 (2014-4-16 16:27:55)

  
  谢谢，一抗我们用的是abcam公司的，我们换了一次，因为第一次没有做出来，我们也咨询了试剂公司相关人员，也跟他们说了我们的实验过程，给他们看了结果，他们公司决定给我们换一只抗体，第二次（就这次），结果还是一样，不过他送来的时候是用冰块保存的（第一次也是），说明书上写着－20度保存，他们是不是应该用干冰保存送来呢？会不会是这个原因？

• wmp1234 (2014-4-16 16:28:13)

  
  我们刚开始摸索条件的时候，也是根据文献上的加了50 微克总蛋白，也是象楼主所说的那样都是背景，后来我做了一个梯度，分别上样30，50，100，150微克，100和150微克的梳子孔处就出来了条带，所以建议楼主在排除其他条件的情况下，也弄个梯度看看呵呵，祝你好运

• 知了知了 (2014-4-16 16:28:35)

  
  真的啊！谢谢楼上的前辈，看来是上样量的问题哦。
  我试试！谢谢！

• 知了知了 (2014-4-16 16:28:54)

  我还有问题要问一下，请问你们的蛋白提取液配方是什么？我们提取的蛋白浓度不是很高，不过减少提取液的话研磨的时候有很多泡沫，可以离心的液体比较少，请问你们用的什么方法呢？ 请问，谁知道ICAM-1在总蛋白的表达丰度吗？我没有查到，谢谢！