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【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进
我养Caco-2细胞,现在已经接种到6孔培养板的插入式小室(即在6孔培养板的每个孔中再加单独的小室,transwell,让Caco-2细胞长在小室的膜上),目前存在的问题是:1.细胞接种不均匀,我已在园内搜索了一些接种技巧,按照那些方法不是很有效,细胞全部集中在中间;2.细胞换液后,原来贴壁的细胞都脱落了,连在一起,用肉眼可见细胞培养液中有白色漂浮物,估计是死细胞,我以为是换液动作太粗鲁了,再换液时又加倍小心,可是那些漂浮物依然存在,不能通过换液除去;3.文献说Caco-2细胞在膜上长5-7天就可以长满,可是7天了,镜下观察,依然是中间有细胞,周围很少,怎么回事呢?有明白的高手请指点一下吧,不胜感激!【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进
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最新回复
箭头儿 (2015-5-11 15:52:50)
目前我也在做这个试验,对你的问题进行讨论,共同学习。
问题一的解决:提高细胞密度,5次方以上,用移液枪均匀滴加植入millicell中即可。
问题二三:Caco-2细胞生长一定密度和时间,细胞间形成紧密连接以及细胞表面分化出微绒毛,换液不小心会导致块状脱落或被吸出,可以在每次换液时,只换部分培养液解决。对于你提到白色漂浮物,我想这可能是细胞分泌或分化过程有关。
另外,我观察了24孔培养板中培养1~30天的Caco-2,1~3天细胞间无边界、块状生长,4天后,视接种细胞密度情况,基本可以形成紧密连接。
备注:如在南京,可以面谈。细胞生长照片等整理好可以上传。
NBA (2015-5-11 15:54:18)
呵呵,我在北京,离你太远了。问一下,你是用密里博的插入式小室,即millicell么?我怀疑他们的膜不利于细胞贴壁。我的细胞接种到膜上已经一周了,但在倒置显微镜下,我只能看到中间有零星的细胞,观察不到成片的形态(不象培养瓶中形态)。如果说细胞密度少(3*105也不少了),但每隔一天换液时,培养液明显变黄,而且我还测电阻了,电阻值一直在增加,这是怎么回事呢?难道我一直没找到细胞?每次移动培养板时,可以看到有很多细胞在动,似乎细胞没有贴壁,如果是死细胞换液后就应该没有了,但换液后这些东西还在,难道是分化的微绒毛?真痛苦啊!你有没有长在膜上的Caco-2细胞形态啊!如能指点一二,万分感谢!
考拉乌拉拉 (2015-5-11 15:54:38)
NBA (2015-5-11 15:54:55)
yizhi (2015-5-11 15:55:11)
纹鹿你在北京哪个单位,我也正在做Caco-2相关试验,可以交流一下吗?
bring (2015-5-11 15:55:36)
我也正在做这个实验,我在往膜上种细胞后,与你的现象正相反,中间有一个缺口,边上的细胞到练成一片。不知道是不是细胞种的不匀。还是没有长融合,或者是被细菌破坏了,在显微镜下是看不到细胞的,所以各种因素都不能确定,我种的密度是5次方,也不行,很郁闷。我在天津
any333 (2015-5-11 15:56:09)
我做过的,不过也不是什么高手,应该是要测膜电位来确定是否单层完全融合吧,换液的时候一定要轻,不能够碰到下面的,说时候transwell也实在说太贵了,一个那么小的孔就是30快钱,还是一次性的。
iii_ii (2015-5-11 15:56:25)
大家好!
高兴看到这个帖子。请问:药物也要做倍比稀释吗?
有没有统一的阳性对照?结果怎么分析呢?
还有,我现在培养瓶里的细胞3天就可以基本长满,
为什么millicell要21天呢?
非常感谢,!!
DCS (2015-5-11 15:56:41)
结肠癌
您好,我是北京的,现急切需要CACO-2或HT29结肠癌细胞株从事毒理学实验,不知你可以赞助赞助我或卖给我,或者交换吗,谢谢!
mickeylin (2015-5-11 15:56:56)
我也正在养CACO-2 细胞,培养了快18天,细胞在TRANSWELL 上漂着一层膜,我不确认除了这膜紧贴着TRANSELL上是否也又一层膜
yychen (2015-5-11 15:57:21)
看到这个标题时真是激动了一会,因为我也要开始养Caco-2细胞了,请大家指教啊。买那millicell是不是就是他们说的插入式培养皿啊?造这个模型是要什么样的装置?是millicell好还是transwell好?
dior (2015-5-11 15:57:40)
我这有一包millipore的millicell插入式培养皿,买了有两个月,但是现在做实验发现和我们的染毒装置不配套,所以现在想转卖掉,型号PICM03050,可以和六孔板配套,只是和我们另外一套染毒装置不配,想要的同志可以联系我啊,价格绝对优惠。谢谢!
gmjghh (2015-5-11 15:58:10)
大家好!
我也正在用millicell养caco-2细胞,我用0.4um的多聚碳脂膜,所以接种细胞后在显微镜下是看不到细胞的,只能看到密布的小孔。
但是等到十几天后,细胞开始分化(我观察认为是分化了)时,可以在镜下看到一些聚集的小亮泡,轻摇六孔板,它们还会随之摆动,但是无论换液还是pbs冲洗都是不会被冲洗下来的,随着越接近20d,它们会越多,所以我觉得这些可能就是分化后的微绒毛吧。
还有,楼主所说,8d电阻值已经到达>200的要求,这只是评价此模型完整性的一项指标吧,电阻值符合要求但是如果未到21d以上,模型没有分化完成,也是不能进行下步试验的。
以上只是我试验中无数碰壁后的一些经验,希望大家多交流~~
youyou99 (2015-5-11 15:58:27)
我用的是0.4um的多聚碳脂膜,养的是bend。3细胞(小鼠脑微血管内皮细胞),不知道怎么回事,今天是种进细胞的第四天,细胞的电阻没有明显变化,我接种的密度是2.5×10的5次方,难道是细胞没有贴壁?同瓶细胞种24孔板,第2天就基本长满了。因为膜是半透明,看不到细胞的情况。我的transwell里面的培基一直都满红的。
feiya (2015-5-11 15:59:20)
feiya (2015-5-11 15:59:41)
shkudo (2015-5-11 15:59:59)
feiya (2015-5-11 16:00:19)
请问小室都要铺胶吗?从哪买胶啊?听说胶的保质期很短,只有3个月,还有具体怎么操作啊?好多问题不懂,谢谢!
feiya (2015-5-11 16:00:46)
我刚定了Corning公司的,通过华粤行仪器公司,说是40-50天到,货号3401,12孔板,聚碳酸酯膜,膜孔径0.4um。有需要买胶的同志吗?可否合买?我在郑州,谢谢!
dog002 (2015-5-11 16:01:09)
【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进