【求助】蛋白超生破碎产生大量气泡

最新回复

• bring (2014-5-26 13:18:16)

  避免气泡的产生,我一般采用口径相对比较大的容器盛放菌液,400W的功率处理一般不会出现多少气泡.一旦出现气泡我建议你还是将气泡滤掉,再重新破碎为宜.

• mimili_901 (2014-5-26 13:18:33)

  我做过真核超声破碎，一般将探头放在液面以下，然后再start，就不会有太多气泡。

• duoduo (2014-5-26 13:19:02)

  大家好，最近做蛋白原核表达，表达后有特异蛋白带，菌体超声波破碎后产生大量气泡，几乎刚刚开始破碎无法进行下去，使破碎很不完全，并且溶菌酶处理后还是破碎不好。为什么会产生大量泡沫，是因为蛋白变性吗，目的蛋白是用pet表达的，后带有his标签，应该是包含体形式。以前也做过其他重组菌株的，并不会这样啊，请教各位帮忙想个办法，怎样才能很好的破碎啊。
  
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  产生气泡的主要原因是探头位置没有放好，和蛋白没有太直接的关系。
  一般探头不要浸没液面太多，比如50-100ml的烧杯中超声，在0.5~1cm深度内
  放置蛋白的样品溶液体积比较多的时候，容器口径大一点，浅一点更好。最好不要直接再离心管中超声
  超声过程中，如果出现声音刺耳的时候，要立即停止，否则会损坏超声探头。
  如果液体产生气泡，要先吸出所有泡沫再重新超声，否则泡沫会越来越多。

• plaa (2014-5-26 13:19:21)

  超声千万不能起泡,起泡的话,蛋白马上变性.超声时,先用少量菌体把超声条件(超声电压和时间)摸索好.探头伸入液面1/3处,不能贴壁.每次超声时间也不宜过长.

• bamboo16 (2014-5-26 13:19:38)

  
  我们破碎的时候加PMSF(异丙醇作溶剂).既可以抑制蛋白酶活性,又有消泡的作用.
  再就是,探头一定要插正,不能碰壁.否则就很容易出现气泡.

• vcve (2014-5-26 13:19:54)

  
  如果使用1.5ml tube破碎,最适体积是200μl,一定要把探头插入液面以下,否则就会产生气泡,产生气泡后蛋白就会失活,不是说因为蛋白失活才导致产生气泡.

• tuuu2 (2014-5-26 13:20:13)

  我一般超声的功率在100W左右,温度在25度左右,气泡不会产生,超声时间可以多一点.

• jkobn (2014-5-26 13:20:31)

  
  降低功率，直到不产生气泡为止！

• lxh031 (2014-5-26 13:20:50)

  和探头的位置有很大关系，最好在液面下二分之一处。我裂解蛋白时刚开始也老出现气泡，调整探头位置后再没有出现过，祝你好运！

• wmp1234 (2014-5-26 13:21:07)

  
  我觉得可能是你用的功率太大的缘故。在超声以前最好选一些多余的样品试超，直到不产生气泡。还有就是探头的深浅，最好不要太深或太浅，我一般选的是液面的三分之一左右。

• 子衿青青 (2014-5-26 13:21:33)

  从我开似做2D的时候,超声就没有产生过气泡.我用1.5ml的离心管超声过200ul和1500ul的液体,都没有问题.我一般把功率选在150w左右.冰浴.

• 子衿青青 (2014-5-26 13:22:48)

  
  100w
  150w
  400w
  请问各需多长时间？
  多谢

• ukonptp (2014-5-26 13:23:12)

  QUOTE:

  原帖由 子衿青青 于 2014-5-26 13:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  100w
  150w
  400w
  请问各需多长时间？
  多谢

  这个需要自己摸条件，缓冲液体系、体积不同，而且菌体密度也不同，超声的参数都有差异。
  你可以间隔取样，镜检观察，直到破菌完全

• bring (2014-5-26 13:35:19)

  
  把我的参数告诉你参考一下:
  400W 工作时间:3sec 间歇时间:3sec 总共破碎时间:6min
  缓冲液体系: PBS
  体积:30ml
  容器:50ml离心管
  PET的是不容易破碎,泡也很难用PMSF消去,我们一般会多破碎一次
  注意要在冰浴环境下破碎!

• 00无名指00 (2014-5-26 13:35:53)

  
  时间的问题不好具体说，根据裂解细菌不同及菌液浓度的不同裂解时间也不一样．超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。