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【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果
在此讨论我们实验室沉痛教训，以使大家借鉴。【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果
在2006年7月至9月22期间，本实验室委托上海生工通过济南代理合成了十几对引物，期间，我们启用了10对引物。实验室伙伴们将目的基因扩增并链接T载体后，委托合成引物同一公司测序，结果发现，10对引物中有5对引物错误:
1:少了一个碱基
2：多了两个碱基
3：错了一个碱基
4：上游引物与下游引物合成的序列完全一致（给我们丢了下游引物）。
5：出现终止密码子一对
上述错误在10对中占有50%的比例，此错误比例惊人，给我们实验室造成严重损失，不仅仅剩余的几十对引物不再敢启用，更重要的是，这半年的工作白费，浪费了人力物力，更延误了我们与某公司签订的合同期。
我们已经与上海生工进行了联系，公司副总李瑞峰经理进行了查证，生工总经理王珞珈表示了道歉。
本科室发布通牒，以后不许在上海生工合成引物，不可靠的引物会对工作造成严重损失，时间是不可挽回的！！！
谨以上述实例提醒大家：当你的PCR做的结果不可思议时，请考虑引物问题。
cuturl('http://www.microbiology-sd.cn/')
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【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果
【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果
最新回复
qhyu (2015-6-05 09:18:59)
恐怖啊，不像是聚合酶错配啊。
PCR (2015-6-05 09:19:18)
相关疾病：
休克
可不是一般的恐怖啊，终于有人同情我了，呜呼，我们被上海生工合成的错误引物炸的休克了啊！连续5个啊～想：PCR扩增获得目的带、连接到T载体、再转化大肠、重复PCR鉴定、测序...多少工艺啊，多少劳动和汗水，全部损失掉～不休克才怪！
woshi (2015-6-05 09:19:38)
我就用过生工的引物一次．谢谢提醒了
caihong (2015-6-05 09:20:26)
shenkunjie (2015-6-05 09:20:42)
我有同感, 我合成的一对引物P不出条带,连非特异性都没有, 多谢提醒
xevin (2015-6-05 09:21:58)
真是无语,对楼主得遭遇真是绝对得同情,哎,现在得合成市场就是这样,大家一直都在搞价格战,结果受害得最终是我们做试验得学生!
KGZ564 (2015-6-05 09:22:17)
可能是搂主的运气差些吧。
我主要在上海生工合成引物，这三年总共有差不多1万个碱基吧，其中大部分是用来做全基因合成的，觉得错的不多。一般合成500bp的基因（共需要合成1000bp的引物）挑4个测序，有2个是完全正确的。
相反，我觉得上海生工的测序要差些。10个样品通常会有3个左右测不出来（之后同样的样品，同样的引物让广州英骏就测出来了）
总体来看，我还是比较信任生工的引物合成的，测序则首选英骏。
忘了说一下，生工引物合成有的在上海，有的在北京。应该是前者好些。
PCR (2015-6-05 09:22:35)
根据KGZ所说，可能是测序出了问题，我非常希望是测序问题！但是，无论是那个问题，都不应该啊，造成的损失太惨重了，哭～～～～啊
dog002 (2015-6-05 09:23:33)
不争吵，在我发这个帖子之前，我已经跟你们生工副总李瑞峰交涉了，他对生工的错误进行了查证，总经理王珞珈进行了口头的道歉，并已通知财务取消所有您的余款挂账。
我们在生工的帐务很少，只是对损失的半年时间感到不平！我们有来往书信，你想读吗？kgz？
ns5fan (2015-6-05 09:26:51)
顶一下，我在生工订的引物都花了一周时间了，什么都扩不出来．连非特异条带都没有．晕，我已换了大概２０多个条件，P了不下２０管什么都出不来．但我的引物跑得出条带，不知道是什么原因？现在想换家公司重新合成，大家给推荐推荐啊！！！！！
ns5fan (2015-6-05 09:29:15)
xue258 (2015-6-05 09:32:47)
宝生物的还可以的，我以前一直用，生工上海的，还可以，只是有的时候脱盐不够好，不过总体还是不错的
abc816 (2015-6-05 09:33:14)
gogo (2015-6-05 09:33:42)
zhy平平 (2015-6-05 09:38:47)
刚收到的，建议大家看看，了解一下引物合成的现状．
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5210950&sty=3&keywords=oligo+6')
dior (2015-6-05 09:39:07)
塞百盛合成的引物还可以,我也一直用着,可以少量试试
feiya (2015-6-05 09:39:57)
大连宝生物的引物也不稳定，我有一次合成7管，其中6管是空白，没有任何产物。呜~~~~~~~
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5210950&sty=3&keywords=oligo+6')
am10 (2015-6-05 09:40:31)
相关疾病：
46XX性发育睾丸疾病
^_^，有这么多相同遭遇的朋友，再苦，也得到安慰了！！
请浏览这篇文章：《多对引物合成错误造成严重损失》cuturl('http://www.microbiology-sd.cn/bbs/context.asp?id=246')
shenkunjie (2015-6-05 09:40:50)
其实有时候大家合成引物默认是5OD,我在sbs合成都是说的2~5OD,有时候就是给我5OD,有时候少一些.但是这样比较能够保证质量.
gmt (2015-6-05 09:41:41)
看了大家的情况，真是找到了一大堆知己啊，
我最近就是一直出现这个问题，刚开始还能扩的出来，怎么换了一批引物，就不停的出现脱尾，没有条代等情况，原来同一批的货，还有可能有不同的情况，看来要赶快换引物了，谢谢大家了，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，唉，真不知道该怎么说中国的这些试验水平，
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