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【求助】虾青素HPLC检测
我最近用自己浓缩的虾青素粗色素油做了一下虾青素液相分析检测,【求助】虾青素HPLC检测
色谱条件:C18柱,流动相:乙腈:水=95:5,检测波长是471nm,样品用甲醇溶解的。
但是出的谱图报告只是在2min时有个倒峰,其它什么东西都没有了,后来把检测波长换到281nm时就有一序列峰,但这肯定是其它物质,虾青素是在400多nm处吸收的。请问这是什么原因
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【求助】虾青素HPLC检测
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-1-17 17:14 作者: vera+ 来源: 分析测试百科网
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zhenxin (2015-1-17 17:15:07)
1、虾青素是在400多nm处吸收,为何检测波长选择471nm?选择虾青素的吸收波长,灵敏度不是更高么?
2、流动相(乙腈:水=95:5)。要知道乙腈的洗脱能力很强,这个比例下,保留性不同的物质分离效果不明显,且保留时间很短。
3、2min处的倒峰,是由于流动相或样品中物质的紫外吸收波长<检测波长引起的,也就是说,样品中紫外吸收波长小于471nm的物质,都可能会形成倒峰。
综上,我认为,471nm,乙腈:水=95:5下,样品在2min处洗脱下来,且以倒峰的信号表现出来。
douding66 (2015-1-17 17:15:24)
1、选择适合的检测波长。不确定可以先扫紫外。
2、调整流动相中乙腈比例(乙腈比例,慢慢调试),在合适的比例上可选择流动性使用缓冲盐,调pH等,达到分离目的。
3、样品用甲醇溶解,会有溶剂效应,可以改用流动相溶解。
BUK (2015-1-17 17:15:44)
流动相得改改,我看他们帮我检测时用的流动相有甲醇:二氯甲烷:乙腈:水,甲醇占85%了,其余三个比较少,自己找合适的比例吧,不能全说了
vera+ (2015-1-17 17:16:03)
QUOTE:
你好,我查的是商业标准(进出口动物源性虾青素检测),应该可以适用的啊,流动相我也试过用75%甲醇,也是倒峰。qqq111 (2015-1-17 17:16:19)
wawa (2015-1-17 17:16:35)
还有一个,就是你要是进样时有空气,也可能会出现倒峰。
vera+ (2015-1-17 17:17:04)
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你好,谢谢你的指点,后来我浓度提高了,把用石油醚萃取的虾青素液直接测,波长选了石油醚最大吸收峰处,就没有倒峰了
969 (2015-1-17 17:18:46)
【求助】虾青素HPLC检测