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【求助】SYBR Green 实时荧光PCR
起得最早的是我的阳性样品,其次的是检测样品需要说明的是检测样品和我的阳性样品不是同一物种,而我要建立的是阳性这一样品的快速检测系统,我想问一下出现现在这种情况是不是证明引物不特异还是别的问题?CT值在30,31那个位置的是阴性对照,阴性对照也出来了是怎么回事?各位大侠帮忙解决一下!谢谢了!【求助】SYBR Green 实时荧光PCR
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最新回复
tewank (2015-3-11 17:40:10)
蓝蜗牛 (2015-3-11 17:40:27)
这位大侠你好!谢谢你!我想请教一下您,我的空白老是在ct值25-26之后的地方出来,我已经排除过污染了所有的都用的是新的,还是出来不知道怎么回事?帮帮我呗
ladyhuahua (2015-3-11 17:40:42)
蓝蜗牛 (2015-3-11 17:41:07)
QUOTE:
我想请教一下您觉得是引物的问题还是污染问题?还是引物量太大?10um的引物我各加了0.5ulvera+ (2015-3-11 17:41:22)
引物还行,一般阴性对照时Ct值大于30就可以了,如果小于30的话只能说是引物设计的不好(排除污染可能)。
蓝蜗牛 (2015-3-11 17:41:41)
eor (2015-3-11 17:41:58)
用的新的也不一定不出现阴性起线,实验室污染也有可能,排除污染可以用dUTP/UNG酶法试试。
蓝蜗牛 (2015-3-11 17:42:16)
ffaa (2015-3-11 17:42:42)
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