【求助】胶原酶溶液如何配制

最新回复

• 66+77 (2015-8-11 16:59:30)

  应该用PBS或Hanks来配，胶原酶发挥作用需要离子强度和合适PH值，光用三蒸水配不利于酶的活性，培养液也不太适合。还要将PH值调到7.4左右。

• dog002 (2015-8-11 17:00:45)

  你可以根据你用胶原酶的目的来配置。如果你是用来消化组织的话你可以用pbs和培养液来配置。一般胶原酶比较合适的ph值在7.3-7.7都可以。浓度你可以配成0.025%，毕竟这是很贵的东东啊！

• veiwu (2015-8-11 17:33:16)

  
  好像文献上都是用的1mg/ml的胶原酶溶液阿，用0.025%的行吗？是不是消化时间要延长阿？

• jude (2015-8-11 17:33:37)

  
  0.1％～0.3％的胶原酶，0.025的浓度太低了。

• gmt (2015-8-11 17:35:24)

  
  可是我用来消化肝细胞效果却很好啊，我想着应该是没有什么问题的。当然树上的确是说的0.1-0.3mg/ml。那就看你用脚远没做什么啦。

• qianqin1977 (2015-8-11 17:35:43)

  胶原酶应该用D-Hank氏液来配。
  不能用三蒸水因为渗透压太低细胞不能耐受，也不能用培养液因为其中的成分复杂对消化有影响，最好也不用Hank氏液因为ca+Mg2+离子易与一些成分结合形成沉淀影响分离（但这是理论上，我曾经试过结果也还不错），PBS文献上没见过，但应该理论上可以用的。
  另外常用浓度为0.1%~0.2%，当然还要看你做什么。

• JK.jon (2015-8-11 17:38:45)

  配制胶原酶首先要看你的目的是什么，其次要看消化的是什么组织。不同的组织需用不同的浓度，不同的浓度消化时间也不同。而且，每一批胶原酶很可能质量不完全一样，所以效果不稳定。胶原酶绝对不能用三蒸水配，渗透压不对，即使消化下来细胞，可能活力很差，不等贴壁就over了。PBS或培养液均可，我都用过。

• shenkunjie (2015-8-11 17:42:16)

  我用来分离干细胞的胶原酶的配制方法是：hepes缓冲液 200ml，胶原酶 0.05g,无水CaCl2 0.15g. hepes缓冲液ph:7.65 37度消化 。效果挺好的

• zhy平平 (2015-8-11 17:42:33)

  
  如果是消化软骨，建议采用的浓度为0.2%,用D_Hanks 配。不知道，你消化的是透明软骨还是弹性软骨，或是纤维软骨？

• kulee (2015-8-11 17:45:04)

  
  可是我用来消化肝细胞效果却很好啊，我想着应该是没有什么问题的。当然树上的确是说的0.1-0.3mg/ml。那就看你用脚远没做什么啦。
  楼上的朋友，有没有搞错啊，书上说的是0.1-0.3ug/ml,不知道是哪儿出了问题？？？急啊。

• caihong (2015-8-11 17:46:48)

  
  可是我用来消化肝细胞效果却很好啊，我想着应该是没有什么问题的。当然树上的确是说的0.1-0.3mg/ml。那就看你用脚远没做什么啦。
  楼上的朋友，有没有搞错啊，书上说的是0.1-0.3ug/ml,不知道是哪儿出了问题？？？急啊。

• yizhi (2015-8-11 17:48:26)

  抱歉！发之前没有核对一下。很是对不住。我用的胶原酶浓度基本上就是0.25mg/ml.

• yizhi (2015-8-11 17:49:09)

  
  是的，各位大侠，胶原酶4怎么过滤啊，是用多大孔径的，我用的是0.22的，但是五十ML要用差不多两个小时。怎么回事？是滤膜有问题吗？

• kulee (2015-8-11 17:50:06)

  
  相关疾病：
  先天性卵巢发育不全综合征
  你可以先用0.45的过一遍后，再用0.22的过！

• 子衿青青 (2015-8-11 17:52:57)

  
  我是用来培养成骨细胞的 ，看文献说是用1mg/ml，不知道可不可以啊

• gmt (2015-8-11 17:54:16)

  
  我见资料上的胶原酶配制是用Hanks，36.5度搅拌溶解2小时，4度过夜。我不明白的是，既然可以36.5度可以溶解2小时，为什么不直接完全溶解，还要4度过夜？

• shenkunjie (2015-8-11 17:55:13)

  
  在从血管消化内皮细胞的过程中，使用的0.2％胶原酶溶液，由培养液配制，含0.1％白蛋白。

• 百分比 (2015-8-11 17:55:32)

  
  胶原酶浓度：0.1-0.5%

• vvmmoy (2015-8-11 17:56:19)

  
  胶原酶的配制可以用DPBS，PBS，HANKS，1640，基本上都没有什么太大问题，一般消化时间为2－3小时或者4度过夜。我们这儿做原代培养一般是37度2－3小时即可，使用浓度为0.1-0.3%，胶原酶对血清不敏感，因此完全培养基也可以配制消化液。司徒镇强书上说0.1-0.3ug/ml肯定是错了。当然含钙离子的液体更好，消化酶活力更高。

• yizhi (2015-8-11 17:56:39)

  
  消化脑组织或视网膜组织用胶原酶2，一般多少浓度呀？