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参考报价: | 面议 | 型号: | 点突变 |
品牌: | 枢密科技 | 产地: | 武汉 |
关注度: | 暂无 | 信息完整度: | |
样本: | 暂无样本 | 典型用户: | 暂无 |
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简介
CRISPR/Cas(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/ Cas)系统是目前被广泛运用的基因编辑系统,其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列,对序列进行切割。其中最常用的是靶向DNA的CRISPR/Cas9系统,此系统是由II类CRISPR/Cas系统改造而来,能够在植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物等多种细胞中,进行有效的靶向编辑,具有操作简易、效率高、以及作用靶位点多等优势。
CRISPR/Cas9系统中sgRNA(short guide RNA)识别并结合目标基因的靶向序列,引导Cas9对结合位点进行剪切,产生DNA双链断裂,通过细胞内的同源重组修复方式,将外源供体DNA定点导入至基因组的靶位点中,从而实现基因敲入。
CRISPR/Cas9基因敲入示意图(Eric Murillo-Rodríguez et al., Sleep and Vigilance, 2018)
将同时包含Cas9和gRNA序列的质粒载体与携带点突变的Donor载体(Oligo)共转入细胞核,Cas9和gRNA的复合物会引起靶位点DNA双链断裂,而后细胞以外源携带目标点突变的Donor作为模板进行同源重组修复,将目标点突变重组到基因组靶位点。Cas9和gRNA的质粒载体携带抗性基因,可进行药筛,药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序,筛选出点突变纯合的阳性克隆。
图1.点突变方案
图2.点突变载体
服务流程
应用
1、细胞疾病模型造模
通过HDR,携带点突变序列的donor oligo (ssODN)替换WT对应的碱基。
2、细胞疾病模型修复
通过HDR,携带WT序列的donor oligo (ssODN)替换对应的突变碱基。
参考文献
[1]Eric Murillo-Rodríguez, Rocha N B , André Barciela Veras, et al. The End of Snoring? Application of CRISPR/Cas9 Genome Editing for Sleep Disorders[J]. Sleep and Vigilance, 2018, 2(1):1 3-21.
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途