荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质检测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参对待测样品中的特定DNA/RNA进行定量分析的方法。

实验原理
上海翼和生物荧光定量PCR检测服务采用SYBR Green荧光染料法，在ABI7500平台上进行mRNA基因表达相对定量。
结果展示
1.RNA琼脂糖凝胶电泳质控
完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。
你的

荧光定量PCR扩增每一条目的基因与内参，均获得单一尖锐熔解曲线峰，提示PCR扩增特异性较好，引物无错配及非特异性扩增。各基因的融解曲线分析如下所示。
融解曲线

三次重复实验数据的重复性较好。每次实验的NTC（无模板对照）均干净。各基因的部分样本扩增曲线如下。

扩增曲线

首先，对所有的样本。用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT=CT（target）-CT（ref）
其次，用校准样本的ΔCT值归一实验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（Test）-ΔCT（calibration）
最后，计算表达水平比率：     
2–ΔΔCT=表达量的比值（2指扩增效率）
得到的结果是通过参照基因表达水平校准的实验样本中目标基因相对于校准样本的增加或减少的倍数。

样本要求

要求RNA样本浓度>50ng／ul以上，体积>15ul

OD260/280为≥2.0

动物/植物组织送样量200mg-2g（干冰保存送样）

荧光定量PCR价格

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