定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也称实时PCR(Real-time PCR)或者实时定量PCR，是指借助荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR指数扩增期间实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化，从而对目的基因进行定量分析的PCR检测技术。

该技术具有特异性强、灵敏度高、污染途径少、检测方法准确等特点，实现了PCR由定性到定量的飞跃，已成为国际公认的核酸定量的标准方法，广泛应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测等许多领域。

荧光定量PCR应用

相对定量PCR

绝对定量PCR

溶解曲线分析

高分率溶解曲线分析

实验步骤

核酸提取(RNA/DNA)-核酸浓度测定-反转录合成cDNA(RNA样品)-荧光定量PCR-实验结果分析

样品类型及样品量：

细胞(≥1×106)；

组织(≥100 mg)；

血液(≥100μl)；

DNA样品(≥2μg，OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好)；

RNA样品(≥2 μg，OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好) ；

反转录的cDNA (≥2μg，纯度在1.9-2.1之间，完整性好)。

样品保存及运输

对于定量PCR检测：

组织样品液氮速冻后保存于-80℃；

细胞可以直接-80 ℃冰箱保存或加入Trizol后保存于-80℃；

后续样品需用干冰寄送。

注：样品需要注意避免各类污染和反复冻融(以免样品降解)。

我们提供

每个样品上机检测时开展三次平行实验，保证实验结果的准确性；

交付详细的检测报告(包括实验试剂、材料仪器、实验方法、实验结果及分析等)；

可提供RNA或DNA的浓度数据，及qPCR的原始数据(包括熔解曲线和扩增曲线)。