游离（总）脂肪酸靶标定量检测分析方案

一、 项目简介

1.1 游离脂肪酸概述

游离脂肪酸（FFA）即非酯化脂肪酸，主要来源于脂蛋白和脂肪组织内甘油三酯（TG）的脂解。脂肪细胞内的TG 在各种脂肪酶作用下被水解为FFA和甘油，被机体各组织利用。有研究表明游离脂肪酸与心血管疾病，肝脏疾病，二型糖尿病有密切联系，正常人体组织对FFA的利用受胰岛素和胰高血糖素等激素的调控。

1.2 技术流程

图1. 游离（总）脂肪酸靶标定量分析流程图

1.3分析内容

基础数据分析包括：数据预处理，定量结果统计分析，Bi-plot分析。

1.4检测平台

分析检测平台：GC-MS

二、检测分析方案

2.1标准品配置

建立标准物质校准曲线，标准物质清单见表1：

表1. 标准物质列表

2.2数据预处理

对原始数据进行峰解卷积，积分，峰对齐，标准化处理。通过原始总离子流(TIC)色谱图，初步观察仪器的保留时间重现性，所测得物质的情况。

图2. 代表样品游离脂肪酸GC-MS总离子流色谱图

2.3 定量结果统计分析

通过标准曲线计算样品中游离脂肪酸的定量结果，并结合学氏T检验统计组间差异表达的化合物。

表3. 游离脂肪酸定量分析结果（部分）

2.4 Bi-Plot分析

对所有数据进行Bi-plot分析能从总体上反应各组样本之间的总体代谢差异和组内样本之间的变异度大小，同时可以直观地观察样品和代谢物之间的关系。使用SIMCA软件(V14.1, Umetrics, Umea, Sweden)对数据进行UV格式化（Unit Variance Scaling）和平均中心化（Mean-Centered）处理，以获得更加可靠且更加直观的结果。软件进行自动化模型拟合分析，获得最可靠数学模型的主成分数目。例图如下所示：

图4. Bi-plot分析（示意图）