不过,应用YAC载体来构建基因组文库,操作非常繁琐困难,一般由专门的公司来完成。2.筛选文库的难易程度黏粒载体一般使用传统的滤膜影印杂交来筛选,但是这种方法对于构建区域图谱及叠连群来说既费力又浪费。大容量载体文库,如P1、PAC、BAC、YAC,以二维阵列保存,既可以用传统的单拷贝的探针杂交法筛选,又可以用PCR进行多克隆的群体筛选。而且,使用高容量载体构建文库,可以减少染色体步查的步骤。3....
BAC载体也是很好的选择,研究者可以利用现有的成熟产品来构建BAC文库,比如百博明创公司的一系列BAC载体及配套试剂盒。 如果目标区域非常大(大于250kb),那么YAC载体就是首选了。不过,应用YAC载体来构建基因组文库,操作非常繁琐困难,一般由专门的公司来完成。 ...
注意:BAC载体连接完以后,需要将连接产物做脱盐处理,除去连接反应缓冲液里的盐分。五、将重组载体转入宿主细胞 如果构建黏粒文库,需要用包装蛋白来包装上述的连接反应产物,测定包装好的黏粒克隆的滴度,然后转染。挑出重组子,鉴定插入片段的大小。如果文库的大小和质量都令人满意的话, 就可以铺板进行文库筛选,或者扩增、保存文库。如果构建BAC文库,应选择电转法,将上述连接产物转入受体菌,涂板长出克隆。...
注意:BAC载体连接完以后,需要将连接产物做脱盐处理,除去连接反应缓冲液里的盐分。 五、将重组载体转入宿主细胞 如果构建黏粒文库,需要用包装蛋白来包装上述的连接反应产物,测定包装好的黏粒克隆的滴度,然后转染。挑出重组子,鉴定插入片段的大小。如果文库的大小和质量都令人满意的话, 就可以铺板进行文库筛选,或者扩增、保存文库。...
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