实时荧光PCR结果分析

　　内容摘要：反应体系中各试剂的用量，可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当的调整。每个反应体系应设置两个平行测试。3.实时荧光反应参数实时荧光定量PCR的反应参数为：37℃，5min;预变性，95℃，3min;95℃，15s，60℃，1min，40个循环。不同仪器可根据仪器要求将反应参数作适当调整。实时荧光PCR结果分析。

　　反应体系中各试剂的用量，可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当的调整。每个反应体系应设置两个平行测试。3.实时荧光反应参数实时荧光定量PCR的反应参数为：37℃，5min;预变性，95℃，3min;95℃，15s，60℃，1min，40个循环。不同仪器可根据仪器要求将反应参数作适当调整。实时荧光PCR结果分析。

　　(1)阂值设定实时荧光PCR反应结束后，应设置荧光信号阈值，一般选择3～15个循环的阴性对照的10倍标准差作为阈值。阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点，且cf值一40为准。

　　(2)实时荧光PcR定性检验的质量控制空白对照：外源基因检测Q值大于或等于40，内参照基因检测Cf值大于或等于40。阴性对照：外源基因检测 Cf值大于或等于40，内参照基因检测Cf值在20～30。阳性对照：外源基因检测Cf值小于或等于34。上述指标有一项不符合者，应重新做实时荧光 PcR扩增。

　　(3)实时荧光PCR结果判定 测试样品外源基因检测值大于或等于40，内参照基因检测值20～30者，阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常者，则可判定该样品未检出转基因成分。测试样品外源基因检测Cf值小于或等于36，内参照基因检测值20～30者，阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常者，则可判定该样品检出转基因成分。

　　测试样外源基因检测c￡值在36～40，应重做实时荧光PcR。再次扩增后的外源基因值仍小于40，且阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常，则可判定为该样品检出转基因成分。再次扩增后的外源基因C￡值大于或等于40，且阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常，则可判定为该样品未检出转基因成分。