实时荧光PcR定性检测

　　内容摘要：实时荧光PCR反应体系及反应参数实时荧光PcR反应体系和反应参数反应体系中各试剂的用量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当的调整。每个反应体系应设置两个平行测试。

　　(1)实时荧光PCR反应体系及反应参数实时荧光PcR反应体系和反应参数反应体系中各试剂的用量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当的调整。每个反应体系应设置两个平行测试。

　　2.不同型号仪器的使用可直接参考仪器使用操作说明。

　　3.当外源基因和内源基因标记相同的荧光报道基因时，应在不同反应管中分别加入外源基因和内源基因的引物、探针，分别进行检测。

　　4.DNA模板的加入量可适当调节。合适的DNA模板量应该是：内源基因检测的c￡值在15～36，外源基因检测的C值在27～36，否则应进一步增加、减少或纯化DNA。

　　5.表中给出的PcR反应体系和反应参数可根据仪器要求的不同进行适当调整。

　　(2)实时荧光PCR结果判定

　　①实时荧光PCR质控标准空白对照：无特异性扩增荧光增幅现象(无Q值)。阴性对照：无特异性扩增荧光增幅现象(无cf值)。阳性对照：外源基因检测C值小于或等于36。上述指标有一项不符合者，应重新做实时荧光PCR扩增。

　　②实时荧光PcR结果判定测试样品内源基因检测C￡值小于或等于36，外源基因检测Cf值大于或等于40，判断该样品不含所检的外源基因。测试样品内源基因检测cf值小于或等于36，外源基因检测C￡值小于或等于36，判断该样品含有所检的外源基因。测试样外源基因检测cf值在36～40，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR。

　　再次扩后的外源基因C￡值仍小于40，且阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常，则可判定为该样品检出转基因成分。再次扩增后的外源基因C￡值大于或等于40，且阴性对照、阳性对照和空白对照结果正常，则可判定为该样品未检出转基因成分。