南蛇藤提取物药理作用及诱导胃癌细胞凋亡研究

南蛇藤是我国民间常用的一种植物药，一些初步的药理研究实验证实其中某些成分具有较强的抗肿瘤活性。如建立人胃癌裸鼠移植瘤模型可探讨南蛇藤茎醋酸乙酯提取物(COE)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的相关蛋白p53、Bcl-2、Bax表达的影响，一些生物医药公司提供蛋白表达外包服务。

癌症是困扰当前医学界的重点难题，其易反复、不易根除、对病患影响极大，一旦病症爆发往往危及患者健康乃至生命。相关学者经过医学研究对于对于癌症细胞与相关蛋白表达的关系有了更深层次的理解。想要彻底根除癌症细胞，需要反复试验、多次临床观察，在进行肿瘤细胞生长及凋亡相关蛋白表达的研究中，有研究人员会委托其他机构进行蛋白表达外包。

重组蛋白表达技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。美迪西提供蛋白表达服务，其拥有多种蛋白表达系统，包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统（杆状病毒）和哺乳动物细胞蛋白表达系统，具备多种融合技术，可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。从方案设计、基因优化、表达条件优化到纯化的技术体系，以提高目的蛋白表达水平。

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，其作为迄今为止发现的与人类肿瘤发生相关性最高的抑癌基因，其研究进展对于肿瘤的发生机制研究和临床治疗具有重要意义。BCL-2家族中的成员是调节细胞凋亡信号通路的重要因子，其中包括能够促进肿瘤细胞凋亡的Bax、BH3-only和能够抑制凋亡的BCL-2三个蛋白亚家族。BAX在正常状态下以单体形式存在，细胞凋亡时转化为有活性的大分子量复合体。近年来研究表明与细胞增殖和癌变有关的癌基因 bcl-2参与了对细胞凋亡、增殖的调控。p53引起细胞发生凋亡的机制包括结合Bcl-2基因，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达从而诱导细胞调亡，也有研究称p53的凋亡调解是通过上调Bax和下调Bcl-2从而改变Bcl-xL/Bcl-xS实现的。

1、南蛇腾提取物的药理研究

药理研究表明南蛇腾具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗生育、昆虫拒食及毒杀等活性。从滇南蛇藤种子中提出一种粗油，对大鼠有镇静及安定作用。用逆流分溶的方法进一步提纯后，得到Mal-Ⅲ，仍具有安定作用，但200毫克／公斤使猫流涎、腹泻、震颤；

再进一步提纯后得Mal-ⅢA，对猫仍有安定作用，而无副作用；如于沸水浴中加热4小时后，安定作用消失。将Mal-ⅢA混悬于吐温80后，注射于狗、猫、猴，小鼠、大鼠腹腔，均有明显的安定作用，并能增强环己巴比妥的作用，对小鼠具有降温效力。本剂小剂量（70毫克／公斤）能对抗五甲烯四氮唑对大鼠的致死作用，但加大剂量则增强其毒性。Mal-ⅢA尚能减少动物自发活动，对麻醉猫，并有降压作用，对大鼠有中等度利尿作用，对离体肠管有拮抗致痉剂作用。

滇南蛇藤种子的油亦具有解痉性质，如对大鼠子宫等，并使血管收缩，但无抗菌活性；种子中提出的苦味树脂，有降压作用，小量使蛙心率减慢，大量使心脏停止于舒张期。

南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物具有抗肿瘤作用，在发挥抗肿瘤作用的同时，对肝脏及免疫系统无明显毒副作用，并可通过提高体内抗氧化酶活性和自由基清除剂水平，保护机体免受氧自由基的攻击，起到肿瘤防治作用；南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物对幽门螺杆菌有一定抑制作用。

细胞实验表明乙酸乙酯提取物能增加细胞在t-BHP损伤下的存活率，提高细胞SOD、GSH-Px的活力，降低MDA含量。RT-PCR实验表明南蛇藤乙酸乙酯提取物能显著下调衰老基因P16、P21和P53的表达。

2、南蛇藤提取物对人胃癌裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白表达的研究

建立人胃癌裸鼠移植瘤模型，随机分为模型组，COE低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组和希罗达(267 mg/kg)组，每组7只，各组ig给药，给药3周后检测裸鼠体质量、肿瘤体积、瘤质量等，绘制肿瘤生长曲线，并计算抑瘤率。应用TUNEL法检测COE处理后各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况；免疫组织化学法和Western blotting技术分别检测各组移植瘤组织和SGC-7901肿瘤细胞中p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。

结果发现COE能够较好地抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长，能明显缩小肿瘤体积，且呈剂量依赖性。COE低、中、高剂量组的抑瘤率分别为33.3%、46.8%、57.7%。TUNEL法显示COE处理后肿瘤细胞凋亡较模型组明显增多。免疫组化结果显示COE处理后移植瘤组织中p53和Bax蛋白表达有升高的趋势，而Bcl-2蛋白表达有降低的趋势。其中与模型组相比，COE高剂量组中p53和Bax蛋白表达显著升高(P<0.001)，而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001)。Western blotting结果显示与免疫组化有大致相同的变化趋势。因此COE对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用，其机制可能与上调p53和Bax的表达，下调Bcl-2的表达，诱导胃癌细胞凋亡有关。