荧光分光光度计基本结构与特点

　　荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光寿命、荧光偏振、荧光强度、量子产率等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。

　　荧光分光光度计基本结构

　　1. 光源：

　　为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

　　2.检测器：

　　一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。

　　3. 样品室：

　　通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排;测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

　　4.发射单色器：

　　置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

　　5.激发单色器：

　　置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。

　　荧光分光光度计功能特点

　　1. 荧光发射光谱

　　选择某一固定波长的光激发样品，记录样品中产生的荧光发射强度与发射波长间的函数关系，即得荧光发射光谱。

　　2. 荧光激发光谱

　　选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度作为激发光波长的函数，即得荧光激发光谱。

　　3.时间分辨技术;

　　可用于对混合物中光谱重叠但有寿命差异的组分进行分辨并分别测量。

　　时间分辨荧光测定公式如下：

　　P(t) = P0 EXP (-t /τ)

　　式中P(t)：拟合指数函数

　　P0：强度取值

　　EXP：指数运算符

　　t：时间取值

　　τ：荧光平均时间寿命