美迪西被誉为中国优秀的药物研发外包服务公司(CRO)之一,在上海建立了一家集化合物合成、化合物活性筛选、结构生物学、药效学评价、药代学评价和毒理学评价为一体的符合国际标准的综合技术服务平台,并得到了国际药品管理部门的认可。www.medicilon.com.cn 

SPR在生物技术药物免疫原性检测上的应用

上一篇 / 下一篇  2019-04-02 09:16:06

在药物研发中,生物技术药物引起的免疫反应对于药物的动力学、药效以及安全性都产生了重要的影响。免疫原性的强弱是生物技术药物开发的决定因素之一,免疫原性检测对于评价药物安全性至关重要。ELISAwestern印迹分析还有表面等离子体共振SPR技术都是生物药物免疫原性检测的常用方法。而基于SPR技术的无需标记、实时检测和灵敏度高等特点,目前已经广泛应用于免疫学的研究中。另外相对于ELISA生物分析技术SPR法对低亲和力药物抗体更为敏感。

1、生物技术药物的免疫原性

生物技术药物是利用基因工程、细胞工程、发酵工程等现代生物技术研究、开发和生产用于临床预防、治疗和诊断的药物。生物技术药物具有免疫原性,许多来源于人的生物技术药物在动物中有免疫原性,所以在动物中重复给予这类药品将产生抗体,有些人源性蛋白质在人中也能产生血清抗体,主要可能是重组药物蛋白质在结构及构型上与人体天然蛋白质有所不同所导致的。

与单抗互补决定区(CDR)特异性结合的抗药物抗体,主要通过中和药物活性对药动学产生影响(即中和抗体);抗药物抗体也可通过其他机制干扰药动/药效学(即非中和抗体),如药物-抗药物抗体免疫复合物形成空间位阻,妨碍有效成分的结合及药效的发挥,从而影响药物的消除、血浆半衰期和组织分布。抗药物抗体(ADA)的产生,影响因素较多,既可以降低药物暴露量,也可以提高药物暴露量;ADA与治疗药物形成的免疫复合物,既可以通过中和药物生物活性,也可通过影响其清除率等参数,来改变血液中药物浓度。

2、表面等离子共振技术(SPR)技术

表面等离子共振技术(SPR)是20世纪90年代发展起来的一种生物分子检测技术,是基于SPR检测生物传感芯片上配位体与分析物作用的一种前沿技术。实践证明,SPR传感器与传统检测手段比较,具有无需对样品进行标记,实时监测、灵敏度高等突出优点。所以在医学诊断、生物监测、生物技术、药品研制和食品安全检测等领域有广阔的应用前景。

SPR可以检测浓度极低或亲和力极小的抗体,是检测抗体的极为有力的手段。在免疫学研究中,SPR技术可以用于抗体活性的检测和抗原表位的预测。有研究者应用该技术对重组抗狂犬病毒人源单克隆抗体NM57Ⅰ期临床实验阶段接受注射的48名志愿者进行抗药物抗体检测。结果表明,该检测方法可达到抗体药物免疫原性检测的基本要求[1]

3SPR技术在TMP-Fc免疫原性检测上的应用

重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(TMP-Fc)主要用于治疗慢性特发性血小板减少性紫癫,TMP-Fc作为重组蛋白注入机体,通常会引发机体产生针对药物本身甚至针对内源性蛋白的抗体。有研究者利用Biacore系统建立并验证基于表面等离子体共振(SPR)技术的免疫原性分析方法,对2种重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(TMP-Fc)在食蟹猴体内的免疫原性(IM)进行比较研究[2]

研究者采用食蟹猴连续皮下注射候选药LMF(L1003001 000μgkg-1)或参照药romiplostim(R300μgkg-1)后采集血清样品,用验证的IM分析方法检测样品中的抗药抗体(ADA)。筛选阈值(CP)采用信噪比(S/N)进行计算;确证阈值(SCP)经免疫抑制试验确定;其他验证指标包括灵敏度、分析范围与Hook效应、药物耐受性与精密度。

结果候选药与参照药筛选阈值分别为CPL1.54CPR1.41。确证阈值分别为SCPL37.6%SCPR40.9%;配制于混合食蟹猴血清(PCMS)中的阳性质控(PC)浓度为164μgmL-1,参数模型拟合良好,未见Hook效应。二者方法灵敏度分别为556463 ngmL-1。药物耐受性数据表明样品S/N值随药物浓度升高而降低,其信号抑制比率(inhibition)反之升高。所有阴性质控(NC)、低浓度LPC与抗体血清rs PC样品变异系数(CV)均不高于25%。样品分析结果表明各给药组均有个体检出ADA,相同剂量下LRADA阳性率均为50%2种方法(anti-Lanti-R)对R的样品检测阳性个体及其检测时间点高度吻合。

因此该研究建立并验证了基于SPR系统的IM分析方法,方法符合生物制品IM研究要求,并成功应用于2TMP-Fc生物样品的ADA检测。

免疫原性检测是生物技术药物临床安全性评价的重要组成部分,药物引起的抗体反应会影响药动学、药效和/或毒性反应。随着科学技术的发展和分子生物学技术的进步,全面、科学地进行药物的免疫原性检测将成为可能。

[1] 利用表面等离子体共振技术检测重组抗体NM57免疫原性[J].

[2] 基于SPR系统的TMP-Fc免疫原性分析方法建立与应用[J].

 


TAG: spr

 

评分:0

我来说两句

显示全部

:loveliness::handshake:victory::funk::time::kiss::call::hug::lol:'(:Q:L;P:$:P:o:@:D:(:)

我的栏目

日历

« 2024-03-29  
     12
3456789
10111213141516
17181920212223
24252627282930
31      

数据统计

  • 访问量: 1
  • 日志数: 594
  • 建立时间: 2016-02-03
  • 更新时间: 2020-09-01

RSS订阅

Open Toolbar