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基于二种酶制剂处理前后旋光度变化的测定法
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下一篇 2012-09-21 15:49:12
A 试剂
A.a 转换酶溶液〔上层酵母萃取物〕
有市售制剂。该溶液应不含蜜二糖酶。它的蔗糖转化酶的活性至少应该与无棉子糖时用于测定蔗糖的酶制剂的活性相当。
A.b 蔗糖转化酶－蜜二糖酶溶液〔下层酵母提取物〕
按
19-8A制备，使用底层发酵酒酵母，不要用发面酵母，蔗糖转化酶活性至少应与(a)中相当，此液只能从酿酒商那里得到
。通过瓷漏斗过滤制得。$$按下述方法测蜜二糖酶活性：加2ml待测液到旋光度为+20.0度S的微酸性蜜里糖溶液〔20ml〕中，在20℃左右放置
30min，加足够的Na2CO3使溶液对石蕊试约呈微碱性。适合于过夜水解每100ml溶液中含小于等于0.2g棉子糖的酶制剂应能在上述条件下水解溶
液中所存在的蜜里糖的35%。对适用于过夜水解每100ml溶液含小于等于0.65g棉子糖的酶制剂应能水解50%的蜜里糖；而用于每100ml中含
0.65－1.3g棉子糖的溶液酶制剂应能水解70%的蜜里糖。对旋光度为+20度S的蜜里糖溶液当水解35，50和70%时其旋光度分别为+16.4度
S，+14.9度S，+12.9度S。
B 测定
对制糖甜菜产品，按表19-1称取样品的
量，并转移至300ml容量瓶，按表中所示加入一定体积的碱式Pb(OAc)2溶液，19-7B(a)，并在20℃下稀释到刻度。混匀后用带棱沟的滤纸过
滤，过滤时漏斗盖紧，弃去最初的25ml滤液。收集到足够量的滤液后加NH4H2PO4〔尽可能少过量〕以除Pb，表19-1。NH4H2PO4的量很易
通过一个小实验来确定，有NH4H2PO4时会出现Pb3(PO4)2沉淀，当有稍过量的盐存在时沉淀通常絮凝，并会很快沉积于瓶底。除Pb的溶液混匀并
过滤，同样至少弃去最初的25ml滤液。$$用200mm测试管在20℃下直接测旋光度，但当溶液中含有一定量的转化糖时，应移取50ml除Pb滤液到
100ml容量瓶，用水稀释至100ml，摇匀，在20℃下测旋光度，最好使用400mm测试管。根据该读数可计算出26g/100ml及200mm测试
管下的旋光度，该值为下式中转化前旋光度的直接读数P。$$分别转移两份50ml无Pb滤液到100ml容量瓶中。向其中一个容量瓶加入5ml转化酶溶液
〔上层酵母提取物〕，向另一个容量瓶中加入5ml转化酶－蜜二糖酶溶液〔下层酵母提取物〕；室温下放置过夜〔最好大于等于20℃〕，稀释到100ml，混
匀，在20℃下测旋光度，最好用带套管的400mm测试管。$$若需要快速水解，可将两种酶溶液各10ml分别加入到有50ml无Pb滤液的100ml容
量瓶中，并在50－55℃的水浴中温育40min。然后加Na2CO3至溶液对石蕊试剂呈显微弱的碱性，在20℃下稀释至刻度，混匀并在同一温度下测旋光
度，最好使用400mm测试管。校正酶光学活性对转换读数的影响，并计算出标准溶液(26g/100ml)下的旋光度值；若有必要可算出200mm测试管
下的旋光度值。$$根据下式计算不含水棉子糖的百分含量R及蔗糖的百分含量S：$$ R＝1.354〔X－Y〕$$ $T表19-1
食用甜菜糖〔产物〕样品澄清及脱铅所需试剂的量$$物质@重量(g/100ml)@碱式Pb(OAc)2〔55度白利糖度〕，ml@NH4H2PO4 g
$$甜菜丝^a^@13@3@0.2$$果浆@100ml^b^@2－4@0.2$$加灰糖滤渣或滤水@26.5@1.5@……^d^$$淡果汁
@52@2@0.2－0.3$$浓果汁@26@4@0.3－0.4$$白糖膏@13or26@3or6@0.3－0.7$$白糖蜜
@13or26@3or6@0.3－0.7$$甲原蜜糖@13or26@5or10@0.3－0.7$$粗或复熔糖膏@13@6@0.3－0.4$$粗或
复熔糖@26@3－4@0.3－0.4$$熔糖器@26@2－3@0.3－0.4$$红糖浆@13@8－10@0.4－0.5$$低未精制原糖浆或糖膏
@13@10@0.4－0.5$$糖质点心或牛奶@26@4－6@0.3－0.4$$斯忒芬法废液及洗液@78or50ml@2－3@0.2$$a
常规萃取法，26g样品萃取到201.2ml溶液中。$$b 稀释到110ml。$$c 在加碱式Pb(OAc)2之前用HOAc中和。$$d
由于Ca在溶液中可部分被磷酸根沉淀，所以有必要加足够量的磷酸盐以使Pb和Ca盐均能充分沉淀，故这里不能给出所加量的确切值。$T
S＝[〔P－2.202X+1.202Y〕100]/{132.12－0.00718[132.12－(P－2.202X+1.202Y)]}$$式中P
为标准溶液的旋光度直接读数；$$X为标准溶液经上层酵母水解校正的旋光度值；Y为标准溶液经下层酵母水解校正的旋光度值。$$X和Y的量按代数值处理。
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