液相色谱柱、液相色谱填料
特点:耐酸碱:pH1-14;对水、DMF等化学试剂均稳定、色谱填料粒径均匀,可实现从分析到制备的线性放大
高聚物型色谱填料在厄他培南纯化方面的应用
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发布日期:2009-5-25 点击次数:33 |
厄他培南(Ertapenem, MK-0826, L-749,345, 商品名INVANZTM)为美国默克公司新近开发的新型广谱碳青霉烯类抗生素,结构式如图5-1。本品分别于2001年11月和2002年4月在美国和欧洲上市,是唯一非肠道给药的I-β甲基碳青霉烯类抗生素,具有广泛的抗菌活性,包括革兰阳性与阴性需氧菌和厌氧菌。临床主要用于敏感细菌感染引起的复杂性腹腔感染、复杂性匍匐及皮下组织感染、复杂性尿路感染、急性盆腔感染[1]。
图1 厄他培南结构式 Fig5-1 Chemical structure of ertapenem
厄他培南在其生产过程中常会混入各种杂质,因此厄他培南的纯化在其生产过程中十分重要。厄他培南的热稳定性非常差[2-8].,这给纯化工艺带来了一定困难,目前对于厄他培南的纯化文献报道较少,主要以柱层析的方法为主,即以硅胶键合C8为分离载体,以缓冲盐和乙腈的体系为洗脱液进行分离纯化[9],但该种方法所用硅胶C8分离载体的粒径较小,成本高,不耐酸碱,不利于生产放大。为此寻找一种粒径大、价格低、化学性质稳定的物质作为分离载体来开发厄他培南的纯化方法,对于工业化生产具有及其重要的意义。 南京麦科菲公司的MKF-GCM-T树脂是一种用于分离的苯乙烯型共聚体色谱填料,属多孔性交联共聚物,具有良好的网状结构和较高的比表面积及特异性的表面性能,通过物理特性可以有选择地吸附有机物质,从而达到分离提纯的目的。本实验使用MKF-GCM-T树脂对厄他培南粗品进行纯化研究,考察该树脂纯化厄他培南粗品的分离纯化条件,并以MKF-TPN色谱柱对厄他培南进行含量测定。 色谱条件 HPLC测定厄他培南粗品的色谱条件:所用仪器:Dionex Summit型高效液相色谱仪;色谱柱:MKF-TPN色谱柱(4.6mm×150mm, 5µm);流动相:0.1%的磷酸水溶液-乙腈(88:12);流速:1mL/min;检测波长:225nm;柱温:室温;进样量:20µL。 AKTA纯化厄他培南的色谱条件:所用仪器:AKTA explorer100制备型色谱;色谱柱:MKF-TPN色谱柱同类型填料所装填的层析柱;流动相:0.02mol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲液-乙腈;流速:1.0mL•min-1;温度:室温;检测波长:225nm;上样量:0.1g。
结果与讨论 1. 厄他培南粗品的分析与检测 按照上述色谱条件分析厄他培南供试品溶液及厄他培南对照品溶液,色谱图如图2所示:
如图2所示:理论塔板数以厄他培南对照品计大于3000;拖尾因子小于1.3;其中厄他培南两个杂质与厄他培南主峰分离度均大于1.5,样品中其它组分未干扰厄他培南的测定,因此确定该色谱条件可用于厄他培南粗品的分析与检测。
2. 厄他培南粗品纯化的HPLC考察 由于MKF-TPN色谱柱的填料性质和用于纯化厄他培南粗品的MKF-GCM-T树脂填料化学性质相似,因此通过MKF-TPN色谱柱对厄他培南粗品的分离得到结果如图3:
Fig3. Chromatogram of ertapenem(Crude) in purification process(optimization-2)
由图3所示,厄他培南与杂质不仅达到了基线分离,且整个分离周期缩短至40min。分别收集流出液中10-15min和30-35min部分,进行色谱检测,得图4:
小结 (1)本文建立了厄他培南粗品的HPLC分析方法,其色谱条件为:所用仪器:Dionex Summit型高效液相色谱仪;色谱柱:MKF-TPN色谱柱(4.6mm×150mm,5µm);流动相:0.1%的磷酸水溶液-乙腈(88:12);流速:1mL/min;检测波长:225nm;柱温:室温;进样量:20µL。 (2)在(1)中所述的色谱条件下对厄他培南对照品和厄他培南粗品进行了分离分析,取得了理想的分离效果。 (3)本文建立了厄他培南粗品的分离纯化方法,其色谱条件为:所用仪器:AKTA explorer100制备型色谱;色谱柱:装填MKF-GCM-T树脂的层析柱(柱规格100mm×15mm 柱体积(1BV)约为10mL);流动相:0-20min,0.02mol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲液-乙腈(97:3),20-40min,0.02mol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲液-乙腈(93:7);流速:1.0mL•min-1;温度:室温;检测波长:225nm;上样量:0.1g。 (4)在(3)中所述的色谱条件下对厄他培南粗品进行了分离纯化,取得了理想的分离效果。 综上所述,MKF-TPN色谱柱可对厄他培南粗品进行分析和检测;MKF-GCM-T树脂填料能很好的应用于厄他培南粗品的分离纯化,且所用填料粒径大、操作方法简单、成本较低,可考虑做进一步放大实验,并应用于实际生产。同时,本文为高聚物型液相色谱填料的在抗生素的分离纯化领域的应用提供了重要的理论和实践方面的参考。 |
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