药典方法与高效毛细管电泳法(HPCE)的比较

　　高效毛细管电泳法是近几十年飞速发展起来的一项新的分析技术。它根据离子在缓冲液中迁移的速度与电场呈正比原理，将凝胶电泳解析度和快速液相色谱技术溶为一体，是继高效液相色谱法出现后分析科学领域的又一次革命。其具有分离效率高(理论板数l06 一107 /m)、快速(20-30 min/次)、用量少(钠升级，对单细胞液进行分离分析)、灵敏度高等优点，可方便地连续洗脱样品。

　　在药物分析中最常用的技术是毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、胶束电动毛细管色谱，其它技术如毛细管等速电泳(CITP)等也有报道。

　　HPCE在生物学中应用十分广泛，在蛋白质、激素多肽、核酸等的鉴定、分离方面发挥了显著作用，对单糖、多糖、脂类研究亦有远大前景，此外在临床分析以及细菌、细菌代谢物测定方面的应用日渐增多。近期的研究表明，HPCE对苷类成分的含量测定研究较多，本文简要介绍高效毛细管电泳法(HPCE)在芍药苷含量测定中应用，并与药典所载方法做比较。。

　　㈠ 2005 年版《中国药典》一部所载方法

　　白芍、赤芍、逍遥丸和八珍益母丸中芍药苷的含量，2005年版《中国药典》中所载方法为高效液相色谱法，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸溶液(14：86)为流动相;检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算应分别不低于2000、3000、2000、5000。

　　加味逍遥丸：色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(用0.05mpl/L磷酸氢二钾溶液调节pH值至7.4(23：77)为流动相;检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于 5000。

　　八珍丸：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-水(17：83)为流动相;检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

　　㈡ 高效毛细管电泳法

　　在2000-2002年间，重庆第三军医大学西南医院药学部的陈勇川等采用高效毛细管电泳法对芍药及成药(逍遥丸、加味逍遥丸、麻仁丸和除湿白带丸、白芍总苷胶囊、八珍丸和八珍益母丸)中芍药苷的含量进行了一系列的研究。现做一简要介绍。

　　实验仪器：Bio Focus 3000型毛细管电泳仪(美国Bio-Rad公司);融熔石英毛细管柱(未涂渍)50μm×50cm(有效分离长度45.5cm)。

　　测定条件：运行缓冲液为50mmo1/L硼砂缓冲液，用氢氧化钠调 pH10.6;操作电压20kv，极性由正到负，检测波长230nm，柱温20℃ ;采用压力进样，压力进样常数为10-1psi×S。运行缓冲液和样品溶液均经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。

　　毛细管冲洗方法：每次开机用超纯水冲洗3min，0.1mol/L氢氧化钠3min，超纯水 3min，运行缓冲液3min。每次测定之间用运行缓冲液冲洗1 min。

　　实验中考察了pH8～11范围的缓冲液，结果发现，pH大于 9.0时，芍药苷能够分离，且所得蜂形较好;当pH小于9.0，则芍药苷峰形变坏且迁移时间延长。最后确定最佳pH为10.6，芍药苷得以很好分离且峰形较好，迁移时间适中。

　　对硼砂浓度在25～100mmol/L的范围内进行了考察，结果发现，随着浓度的增加分离度增加，但同时电流增加造成基线不稳，兼顾二者关系最后确定硼砂缓冲液浓度为50mmol/L。

　　HPCE对白芍、赤芍、逍遥丸和加味逍遥丸等其余成药中芍药苷的定量是准确有效的，与HPLC法结果基本一致。HPCE较HPLC具有分析速度快，进样量少、分离效率高、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等的特点。中国药典2005版将HPLC作为白芍、赤芍和逍遥丸、加味逍遥丸、八珍丸、八珍益母丸中芍药苷定量的方法，要求理论板数分别不低于2000、 3000、2000、5000、2000、5000，而HPCE的理论板数可达到l00000以上。分离效率大大高于HPLC。

　　HPCE 无疑为芍药及成药中芍药苷的的定量提供了一个新的途径，开拓了分析手段，也可为同类中成药的质量控制提供参考。