毛细管电泳法测定复方芦丁片中的芦丁和维生素C

上一篇 / 下一篇 2010-06-15 10:30:13

　　复方芦于片属于维生素类药。主要用于高血压病的辅助治疗，其主要成分为芦丁和维生素C，芦丁是维生素P的一种，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性及抗炎、抗病毒等作用;维生素C为人体必需的营养成分，临床用于坏血病的预防及治疗，可增加人体的抵抗力[1]，芦丁[2，3]和维C[4，5]的测定方法有很多，其中液相色谱法[6]较多被应用，陈刚等[7]用毛细管电泳电化学柱端检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维 C，但电化学检测法存在电极制备比较困难，操作繁琐的缺点，本研究采用紫外检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维C。

　　1 实验部分

　　1.1 仪器和试剂

　　ACS-2000毛细管电泳仪(中国科学院研究生院应用化学研究所);8823-B紫外检测器(北京新技术研究所)，检测波长254nm，未涂层弹性石英毛细管柱(50μm i.d. 总长50cm，有效长度40m(河北永年光导纤维厂)，PHS-3型酸度计(上海雷磁仪器厂)。

　　芦丁(baicalm)(中国药品生物制品检定所);复方芦丁片(北京市燕京制药厂，批号981104);其它试剂均为分析纯，水为二次重蒸水。

　　1.2 标准溶液的制备

　　准确称取复方芦丁和维生素C，分别用适量乙醇及水溶液，使浓度分别为1.0mg/Ml 和10.0mg/mL, 以0.45nm滤膜过滤后备用。

　　1.3 样品溶液的制备

　　将多片复方芦丁片研成细粉，准确称取0.5g的粉末于50mL 溶量瓶中，加30mmol/L 硼砂-乙醇(体积比1：1)混合溶液20Ml，于50C水浴中预热15min，超声助深2min后定容，经普通滤纸过滤，即得复方芦丁片样品溶液，以0.45nm滤膜过滤后备用。

　　1.4 实验条件的选择

　　以30mmol/L 硼砂缓冲溶液(硼酸调至Ph7.50)为电泳介质，未涂层弹性石英毛细管(50nm i. d，总长50cm，用于分离的有效长度为40cm)。所有溶液使用前均用0.45μm滤膜过滤，每次实验后依次以0.01 mol/L NaOH溶液、蒸馏水及电泳缓冲溶液清洗毛细管10min，然后进行分离测定，实验过程中采用电动进样，采样时间5s，采样电压10kV，分离电压 10kV，检测波长254mm，测定峰电流的高度，所有实验均在室温下进行。

　　2 结果与讨论

　　2.1 缓冲液pH值的影响

　　电泳液的pH值对分离效果有着很大的影响。在实验过程中发现，随着缓冲溶液pH值的增大，芦丁及维C的迁移时间均有所减小，分离度变差，故选择 pH7.50。

　　2.2 分离电压及缓冲溶液浓度的影响

　　上述实验条件下分别考察了分离电压(6~20Kv)及缓冲溶液浓度(10~100mmol/L)的影响，结果发现，各组分的迁移率随分离电压的降低而减小，迁移时间增大，分离度提高但谱带展宽且峰高降低，随着高压增高，基线噪音也增大，分离度变差，随缓冲溶液浓度的增加，迁移时间增大，但电流增大会导致毛细管发热，降低分离度，故实验过程中选用10kV作为分离电压，30mmol/L的Na2B4O7-H3BO3(pH7.50)为缓冲溶液，在此条件下，芦丁和维生素C在13min内得到了良好的分离。

　　2.3 进样时间的选择

　　分离电压10kV，选择进样时间为2，4，6，8，10和12s，测定芦丁与维C的峰高与进样时间的关系，发现8s后峰高增加不明显，但导致峰展宽和拖尾，故选择进样时间为5s。

　　2.4 工作曲线及检测限

　　在上述实验条件下，对一系列芦丁和维C的标准混合样品进行分析测定，测定其峰高与浓度的关系，结果如表1所示。

　　表1 芦丁和维C的回归方程及检测限

　　Tab.1 Regression equations and detection limits for rutin and vitamin C

　　样品回归方程相关线性范围检测限

　　y=a+bx 系数 (mg/mL) (mg/mL)

　　芦丁 y=21.52x+0.21 0.9995 0.5~0.005 0.002

　　维生素C y=5.475x-0.49 0.9990 5.0~0.05 0.01

　　*y和x分别表示峰高(nA)和被测物浓度(mg/mL);* *检测限按3倍噪声计算

　　图1 样品的毛细管电泳图