用Agilent 1120一体式液相色谱仪同时测定扑热息痛_双氯芬酸和布洛芬的方法建立和验证

前言

　　在药物及其杂质QA/QC的常规分析中，使用高准确度、高精密度和耐用的液相色谱系统很重要。Agilent 1120 一体式液相色谱仪基于已被证明了的可靠设计，可获得所需的高质量数据。非常适用于药物的常规QA/QC分析。在本研究中，我们测定了几种药物的精密度、线性和检测限(LOD)。

实验

仪器
　　• Agilent 1120一体式液相色谱仪包括配备了脱气机的梯度泵、带样品盘的自动进样器、柱温箱和可变波长检测器，见图1。

　　• Agilent HC-C18(2)，高碳载量，150 x 4.6 mm，5 μm粒径柱

　　• Agilent EZChrom Elite Compact软件

色谱条件
　　• 流动相：
　　A: 水+ 0.05 % TFA
　　B: 乙腈+ 0.045 % TFA

　　• 梯度：
　　0分钟, 25 %B;
　　1 分钟, 25 %B;
　　4 分钟, 60 %B;
　　7 分钟, 70 %B

　　• 流速：1.5 mL/min

　　• 进样量： 3 μL

　　• 柱温：40 °C

　　• 检测波长：230 nm
　　峰宽> 0.05 分钟

　　• 分析时间： 8 分钟

　　• 后时间： 2分钟

结果与讨论

　　选择扑热息痛、布洛芬和双氯芬酸作为评价精密度、线性和检出限的化合物。安息香酸作内标（ISTD）。表1 列出了所用的浓度。建立色谱方法，使所有化合物都得到基线分离。由于扑热息痛在C-18固定相上几乎没有保留，需要特别处理。因此，选择起始条件要让扑热息痛在选定的色谱柱上至少有一些保留。

　　另外，方法开发的目的还要使总分析时间尽可能短。分析和平衡时间限制在10 分钟以内（图2）。流动相含三氟醋酸作为改性剂，它对保留时间和峰形都有改进作用。4 分钟的第一个梯度时间足够快，保证第一个峰和第二个峰之间的时间尽可能短。

精密度
　　用UV检测分析药物，保留时间的精密度非常重要。另外，纳克浓度的面积精密度也必须小于1 %，才能符合规范的要求。用浓度2 测定保留时间和峰面积的精密度。结果见图3和表2。图3是十次分析图谱的重叠。

检测限
　　根据浓度7 得到的色谱图计算检测限，见表3。布洛芬和双氯芬酸的检测限在几百pg 范围，扑热息痛和安息香酸在几十pg范围。

线性
　　用浓度水平从1到7进行线性试验。图4 显示了扑热息痛的线性，以此作为实例。结果表明，在整个浓度范围内线性良好。表4 列出了所有化合物的相关系数。

结论

　　用Agilent 1120一体式液相色谱仪分析了药物化合物。用该仪器分析这些化合物可以达到很高的保留时间和峰面积精密度。保留时间精密度小于0.07 % RSD，基线分离峰的精密度小于1.0%RSD。检出限在13到298 pg之间。结果显示在分析浓度范围内具有良好的线性，相关系数在0.999910到0.999975之间。