有关物质方法验证（HPLC）
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评论( 24 )
最近在做原料药的有关物质方法验证，小弟是头一次搞这个东西，有很多问题都不大明白，特向各位老师请教。有些问题请不要见笑。。。。
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3)：甲醇：乙腈=90:6：4
柱子：C18
流速：0.8ml/min
检测波长：210nm
进样量：20ul
问题
1、在进行检测时，空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰（峰高大概是0.07mv，想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊）。不知道是什么原因，
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质（丙氨酸）出峰时间正好重叠，而且峰形不好，达不到注册要求的（对称性和分离度），但主峰符合要求。
[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 08:11 编辑 ]
样品.JPG
空白.JPG
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3)：甲醇：乙腈=90:6：4
柱子：C18
流速：0.8ml/min
检测波长：210nm
进样量：20ul
问题
1、在进行检测时，空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰（峰高大概是0.07mv，想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊）。不知道是什么原因，
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质（丙氨酸）出峰时间正好重叠，而且峰形不好，达不到注册要求的（对称性和分离度），但主峰符合要求。
[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 08:11 编辑 ]
样品.JPG
空白.JPG
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ttkl533发布于2010-09-02 17:59:59
- 调整分析方法～
2.8min左右一般是进样后系统死体积造成的波动，所以你在空白里也能看到。
另外，你的检测波长是210，接近甲醇等的末端吸收，所以基线会比较难看。
HEC_css发布于2010-09-02 18:02:10
- 空白峰不就是溶剂峰吗？溶剂和流动相是一样的吗？
检测波长选在210nm，甲醇的末端吸收在205nm，应该也有一定的影响吧
unknow发布于2010-09-02 18:13:05
- 回复 #1 zhangyandong4 的帖子
空白出峰只能是溶剂峰了。
如果丙氨酸是需要控制的杂质，
1、有其他方法进行控制，那液相有关物质检查这项就可以不包括它，不必积分
2、没有其他方法控制，就需调整流动相比例（增加水的比例），使其跟溶剂峰分开，再积分。
NVIDIA发布于2010-09-02 20:31:58
- 请问你的空白是打一针溶剂还是直接inject?
饮食男女发布于2010-09-02 20:32:23
- 1。进一针流动相，看看那个峰是从哪里来的？
2。那个杂质是不是你们需要控制的？如果不需要控制，那就可以不管；如果要控制，那就要重选方法了
zhangyandong4发布于2010-09-03 07:37:17
- 回复 #3 HEC_css 的帖子
我用的就是流动相溶的，进的空白溶剂就是流动相。
- zhangyandong4发布于2010-09-03 07:42:01
- 回复 #6 饮食男女 的帖子
此肯定需要控制的，含量还不小，国家药典有用薄层色谱方法控制，但是小弟不大熟练那个分析方法，而且即使将此杂质分开来测，那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的，所以它影响杂质的总量。小弟有点笨，希望老师给与指导，谢谢。
- zhangyandong4发布于2010-09-03 07:43:01
- 回复 #5 NVIDIA 的帖子
我们的空白溶剂是流动相，直接进的流动相。
- zhangyandong4发布于2010-09-03 07:46:12
- 回复 #4 unknow 的帖子
1、药典上有薄层色谱的方法进行控制，但是有关物质需要知道总量，因为丙氨酸的含量无法定量，所以总量是很影响的。指导法则杂质的总量不能超过2%，而药典的对丙氨酸的控制为1%以下。
2、流动相的水和有机溶剂的比例，我调试过了，丙氨酸的峰始终在2.8-3.1之间，很让我崩溃。
希望老师指导。
[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 07:49 编辑 ]
- zhangyandong4发布于2010-09-03 08:14:50
- 上传两张图片，这样更加明了，谢谢老师的回复。
header发布于2010-09-03 10:17:34
- 甲醇的溶剂峰
- liuzhangwee发布于2010-09-03 10:18:46
- 柱子有多长？有没有可能是溶剂？
- zhangyandong4发布于2010-09-03 11:01:29
- 回复 #12 header 的帖子
进流动相按理能消除此峰的，请问有没有办法消除这个峰啊。
- zhangyandong4发布于2010-09-03 11:02:50
- 回复 #13 liuzhangwee 的帖子
250㎜*4.6㎜ 5um
- Erica2088wr发布于2010-09-03 11:09:09
- 流动相比例改变下试试看！
- DragonsABC发布于2010-09-03 11:10:36
- 可以进一个空白的溶剂（就是不加你的主产物），然后用机器自带的软件把这个空白的溶剂峰消掉试试
- zhangyandong4发布于2010-09-03 11:17:07
- 回复 #16 Erica2088wr 的帖子
流动相比例改过了，很多比例都试过。还是不行。。。。。
- zhangyandong4发布于2010-09-03 11:18:24
- 回复 #17 DragonsABC 的帖子
这样操作可以吗？不知道那种液相能消除空白溶剂的峰啊。。。。。
LUMGR发布于2010-09-03 11:24:22
- 你想解决的问题是什么？
我感觉是否流动相被丙氨酸污染了
- zhangyandong4发布于2010-09-03 11:53:40
- 回复 #20 LUMGR 的帖子
进流动相时不出峰
或者丙氨酸的出峰时间不和此峰重叠就行。
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- 更新时间: 2010-09-10
