门冬酰胺酶（埃希）

制法要求

本品所用的生产菌种来源途径应经国家有关部门批准并应符合国家有关的管理规范,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。

性状

本品为白色结晶性粉末;无臭。本品在水中易溶,在乙醇和乙醚中不溶。

鉴别

(1)取本品5mg,加水1ml使溶解,加20%氢氧化钠溶液5ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,摇匀,溶液应显蓝紫色(2)照高效液相色谱法(通则0512)试验供试品溶液取本品适量,加流动相A溶解并定量稀释制成每1m1中约含1mg的溶液。对照品溶液取门冬酰胺酶（埃希）对照品,加流动相A溶解并定量稀释制成每1m1中约含1mg的溶液。色谱条件用辛基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm250mm);以0.05%三氟醋酸溶液为流动相A,以三氟醋酸40%乙腈溶液(0.5:1000)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;流速为每分钟1ml;检测波长为220nm;进样体积20l时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)010075测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图结果判定供试品溶液色谱图中主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致

检查

酸碱度取本品,加水溶解并稀释制成每1m中含10mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为6.5~7.5。溶液的澄清度与颜色取本品,加水溶解并稀释制成每nl中含5mg的溶液,依法测定(通则0901第一法和通则0902第一法),溶液应澄清无色纯度照分子排阻色谱法(通则0514)测定。供试品溶液取本品适量,加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液色谱条件用适合分离分子量为10000~500000球状蛋白的色谱用亲水改性硅胶为填充剂;以0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.7)(取磷酸二氢钠6.0g、磷酸氢二钠20.2g,加水900ml,用磷酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.7,加水至1000ml)为流动相;流速为每分钟0.6ml;检测波长为280nm进样体积20p测定法精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。限度按峰面积归一化法计算主峰相对百分含量,应不得低于97.0%。干燥失重取本品0.1g,置105℃干燥3小时,减失重量不得过5.0%(通则0831)。重金属取本品0.5g,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之二十异常毒性取本品,照注射用门冬酰胺酶（埃希）项下的方法检查,应符合规定。细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1单位门冬酰胺酶（埃希）中含内毒素的量应小于0.015EU。降压物质取本品,依法检查(通则1145),剂量按猫体重1kg注射1万单位,应符合规定

效价测定

酶活力照紫外可见分光光度法(通则0401)测定。磷酸盐缓冲液取0.1mol/L磷酸氢二钠溶液适量,用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH值至8.0。供试品溶液取本品约0.1g,精密称定,加磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5单位的溶液。对照品溶液取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成约0.0015mo/L的溶液。测定法取试管3支(14cm×1.2cm),各加入用磷酸盐缓冲液配制的0.33%门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预热3分钟,分别于第1管(t)中加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,第2、3管(t)中各精密加入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟,立即于第1管(t0)中精密加入供试品溶液0.1ml,第2、3管(t)中各加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,摇匀,分别作为空白反应液(to)和反应液(t)。精密量取to、t和对照品溶液各0.5ml,置试管中,各加水7.0ml与碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g,加水至100ml,临用前与20%氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml,混匀,另取试管1支,加水7.5ml与碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管,室温放置15分钟,在450nm的波长处分别测定t吸光度A0、t吸光度A1和对照品溶液吸光度As,以A:的平均值,按下式计算:效价(单位/mg)=A-A)×5×稀释倍数XFAs×称样量(mg)式中5为反应常数;F为对照品溶液浓度的校正值效价单位定义:在上述条件下,一个门冬酰胺酶单位相当于每分钟分解门冬酰胺产生1mol氨所需的酶量。蛋白质含量取本品约20mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得比活由测得的效价和蛋白质含量计算每1mg蛋白中含门冬酰胺酶活力的单位数

类别

抗肿瘤药

贮藏

遮光,密封,冷处保存

制剂

注射用门冬酰胺酶（埃希）

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