waters LCT使用中流动相的干扰?
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- anny_ll发布于2009-08-27 22:50:26
- 补充:
我也换了新的柱子,干扰依旧。
- gitde发布于2009-08-28 17:24:43
- 是不是你的MS之前被其他东西污染了呢?
- anny_ll发布于2009-08-28 21:45:17
- 今天做干扰消失了
我昨天用流动相冲了一夜的柱子,今天干扰就神秘消失了,我太高兴了,可是又感到TOF的重现性咋个这么差呢?低浓度的对照品有时出锋,有时又被其他杂质锋掩盖了。我还以为经过提取精密质量数就可以得到单一物质的质谱峰了,结果是明明写的是316.2217,结果出来了个342的质谱峰,LCT有点让我失望了。
- aa_tang发布于2009-08-29 09:04:15
- 回复 #1 anny_ll 的帖子
LC-MS分析,遇到样品残留现象,概括起来也就两部分:
1. HPLC部分——进样器残留、管路及色谱柱强吸附;
2. MS部分——通常是离子源被污染。
从楼主描述的现象来看,肯定是HPLC部分引发的问题。“不进样,正常;换新的柱子,干扰依旧。”怀疑是进样器管路部分,因为对照品溶液浓度过大,某些地方有残留。
低浓度的对照品,MS重现性不好,可能是因为化学噪音干扰太大。优化色谱分离条件,或者调节质谱参数来增强信号。
- j-1982发布于2009-08-30 08:02:11
- 回复 #4 anny_ll 的帖子
嘿,你也真行,估计年纪还没LCT大呢,就在这谈“失望”?赶紧醒醒吧,你!
遇到问题别慌,按部就班,有目的性的去试探、去处理。
就像上述残留问题,经过自己的排除,摆明了与质谱无关、与柱子也无干(你居然用流动相冲了一晚上柱子!不知冲柱子时质谱是不是也接着跟着受罪!)。
不冲一晚上柱子前还不能彻底排除进样针的干系,但冲之后证明与进样针也无关,不过为证明这点付出的代价太重了,你完全可以换一根进样针试试去排除的!
现在唯一剩下的污染源就是柱前管路了!流动相冲洗的情况下管路怎么可能会挂样品呢?自然是某处存在了死角。就剩进样口那处嫌疑最大了!可以用注射器吸甲醇去冲洗进样口。或者不接柱子开流动相并自动进几次最大量甲醇样冲洗管路。
得了,要学会“吃一堑、长一智”呀!
加油!
- gfzhang发布于2009-08-30 12:19:44
- 回复 #1 anny_ll 的帖子
我估计是你的流动相水的问题,
类似的情况我也遇到过, 使用双蒸水一般不会出现这个问题.
你不妨重新验证一下, 否则以后可能还会有类似情况.
- liuwei发布于2009-08-31 09:24:47
- 回复 #1 anny_ll 的帖子
我也没做过这个。但是从问题可以看到,很有可能是液相受到高浓度的对照品的污染了!干扰峰的强度如何?建议你继续冲洗你的液相和needle,可以冲一天试试。如果还有,那就要考虑是不是一些试剂收到对照品的污染。
- wang999983发布于2009-08-31 10:09:52
- 回复 #1 anny_ll 的帖子
我建议你查一下进样系统(包括进样针、阀门等)有没有污染;再建议你先在LC上做好预备试验,摸好条件再上LC-MS,要降低进样浓度。
祝你成功!
- 出国吧发布于2009-08-31 22:42:51
- TOF的重现性确实不行,浓度太小,分子量就会差很大,要自己调节(调节就是核心技术了)
我们做的时候还有个问题就是没有P的数据库,结果我们有个同事合成的东西有P.结果不能用里面那个分析i-fit值的软件。
不过后来调了一下,调到了分子量最后一位差2-5之间,应该说是非常好了。
不过发的文章不高,TOF的图应该是jacs之类的要求把(我们同事说的)
我们是直接进样的,没有经过柱子。TOF对水的要求也很高吧,那个时候白工过来说,屈臣氏的水比娃哈哈的好,比MiliQ的好,囧。
好像老外做,直接买的那种质谱级别的水吧。
还有就是实验室的条件了,温度控制,无尘间。
- weelai发布于2009-09-03 11:14:36
- 回复 #1 anny_ll 的帖子
污染源一般来说可能包括:HPLC进样体系、色谱柱、质谱、流动相用水等。
1."而且如果我的对照品的两种外消旋体分离的好,空白干扰也会分开,如果对照品的两种外消旋体融合为一个峰,空白也是一个峰"
说明污染源并非来自质谱离子源部分,应该是高效液相色谱部分的问题。
2.“wash needle无数次,任然出峰依旧,而且没有减小的趋势。”
应该不是进样针的问题
3.“我也换了新的柱子,干扰依旧。”
不是色谱柱吸附造成的污染。
因此,污染很可能剩下两种来源:
(1) 进样口至柱前管路部分,这部分的可能性最大;
(2) 如果你的干扰峰高度持续稳定,请排除流动相用水是否存在污染(你上不同的对照品,干扰峰也不同,如果两次所用流动相为同一批次,可排除此点)。