艾美捷小鼠TNF-α ELISA试剂盒相关程序介绍

TNF-α ELISA试剂盒将用于检测和量化内源性TNF-α的蛋白质水平。该测定可识别小鼠TNF-α。TNF-α特异性抗体已预先包被到微孔上。样品中的TNF-α蛋白在孵育后被包被的抗体捕获。经过大量洗涤后，加入另一种针对TNF-α的生物素化特异性抗体以检测捕获的TNF-α蛋白。对于信号开发，加入链霉亲和素-HRP，然后加入四甲基联苯胺（TMB）试剂。含有硫酸的溶液用于停止显色，并且在450nm处可测量与结合蛋白量成比例的颜色强度，校正波长设置为630nm。

艾美捷小鼠TNF-α ELISA试剂盒#NDC-KSP-ZWL3G1-96基本参数：

应用 酶联免疫吸附法

描述 小鼠 TNF-α 酶联免疫酶抑制剂试剂盒

类型 检测与检测

范围 7.8-500 皮克/毫升

研究领域 细胞信号传导

样品类型 血清，血浆

敏感性 1.0 皮克/毫升

规格 96t

物种反应性 鼠

材料/试剂：

包衣抗体（包衣缓冲液中1-10μg/ml）

样品、标准品和对照品

初级抗体（未标记或生物素化）

酶标记的第二抗体

基底

涂层缓冲液：0.15M碳酸钠，0.35M碳酸氢钠，pH 9.6

（碳酸盐涂层缓冲液）

磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH7.4

封闭缓冲液：PBS，1%BSA

洗涤溶液：PBS，0.05%Tween--20

稀释缓冲液：PBS，0.05%Tween--20，0.1%牛血清白蛋白；PBS，0.1%牛血清白蛋白

停止解决方案；2%草酸

小鼠TNF-α ELISA试剂盒相关程序：

在测定之前，两种抗体制剂都应纯化且不含白蛋白。这个须标记检测抗体。

1.捕获抗体涂层

将约100μl的涂层抗体溶液加入到每个井。所使用的抗体的量将取决于个体测定，优化缓冲液和涂层浓度（1-10μg/孔）。抽吸涂层溶液。

2.闭塞

微量滴定板上蛋白质结合的剩余位点必须饱和通过与阻断缓冲液孵育。用200μl封闭缓冲液填充孔。用粘性塑料覆盖板，在室温下孵育60-90分钟温度或在4°C下过夜。用洗涤液洗井四次。

3.样品培养

将100μl稀释后的样品、标准品和对照品加入孔中。全部的稀释应在稀释缓冲液中进行。用粘性塑料覆盖板，并在37°C下孵育60-90分钟。用清洗液将盘子清洗四次。

4.与第一抗体孵育

添加100μl一级抗体。添加量可在中确定初步实验。为了准确定量，第一抗体应该过量使用。所有稀释均应在稀释缓冲液中进行。

5.与第二抗体（或在生物素化的第一抗体）

添加100μl标记的第二抗体。要添加的数量可以是在初步实验中确定。为了精确定量，标记

应过量使用第二抗体。所有稀释均应在稀释缓冲液。用粘性塑料覆盖板，在室温下孵育60-90分钟温度或-20°C。用洗涤液洗涤四次。

6.底物培养

按照制造商的指示添加基材。经过建议的培养时间后，将停止溶液添加到每个孔中。可以在ELISA读取器上测量目标波长下的光密度在加入停止溶液后30分钟内。

7.数据分析

计算每组重复标准品的平均吸光度值，样品和对照。如果单个吸光度值与相应的吸光度值相差超过15%平均值，则认为结果可疑，应重新分析样品。通过使用能够从而产生良好的曲线拟合。如果样品已被稀释，则根据标准曲线确定的浓度必须乘以稀释系数。

来源：https://www.amyjet.com/products/NDC-KSP-ZWL3G1-96.shtml