NGS Normalizer Kit（NGB-61900）使用前注意事项

NGS Normalizer Kit（NGB-61900）：去除引物二聚体；同时清理和规范PCR产品；使用离心法快速（不到20分钟）、高通量且易于处理；足够的洗脱体积（100µL）用于重复或未来的测定；非磁珠净化。

艾美捷NGS Normalizer Kit允许高通量NGS文库PCR扩增子NGS文库PCR产物浓度的净化和标准化（~5±1 ng/µL）。清理去除了所有PCR副产物，包括引物、二聚体、酶和未合并的核苷酸。纯化基于96孔柱色谱法，使用Norgen的专有树脂作为分离基质。金额每个96孔中的Norgen矩阵被优化为具有有限的结合能力，因此每个孔可以洗脱相等浓度的PCR产物。

该过程包括首先添加3卷将缓冲液SK加入到PCR产物中，然后将混合物装载到96孔标准化上盘子然后用所提供的洗涤溶液A洗涤结合的PCR扩增子，以便除去任何残留的杂质，并用洗脱缓冲液B洗脱纯化的PCR扩增子。纯化和标准化的文库PCR扩增子可以用于NGS工作流程和其他测序应用。

NGS Normalizer Kit使用前注意事项：

•应使用变速离心机以获得最大的套件性能。如果变量高速离心机是不可用的，可以使用固定速度的离心机，但减少可以观察到产率。

•通过添加90 mL 96-100%乙醇制备工作浓度的洗涤溶液a（由用户提供）至供应的含有浓缩洗涤溶液的瓶子

A.这将提供128毫升的最终体积。瓶子上的标签有一个盒子，可以检查以表明已添加乙醇。

1.将3体积的缓冲液SK直接添加到包含文库PCR延伸的每个孔中产品（例如：将60µL缓冲液SK添加到20µL文库PCR产物中）。混合方式上下吸移或用胶带涡旋密封板并短暂离心盘子。

2.将96孔归一化板放置在所提供的96孔收集板的顶部。

3.将混合物加入96孔正火板的孔中。

4.以最大速度或3200 x g（约4000 RPM）离心组件2分钟。

5.丢弃流通。重新组装96井正火板和96井收集板。

注：确保每个孔中的所有裂解物都已进入底部盘子如果整个裂解液体积未通过，则再离心2分钟。

6.将400µL洗涤溶液A涂抹在96孔正火板的每个孔上。以最大速度或3200 x g（约4000 RPM）离心组件2分钟。

注：确保每个孔中的所有裂解物都已进入底部盘子如果整个裂解液体积未通过，则再离心2分钟。

7.丢弃流通。重新组装96井正火板和96井收集板。

8.重复步骤6和7，再次清洗盘子。

9.以最大速度或3200 x g（约4000 RPM）离心组件15分钟以使板完全干燥。

10.在纸巾上轻轻拍打96孔正火板的底部。

11.堆叠96孔正火板和96孔洗脱板（提供）。

12.向96孔板的每个孔中加入100µL洗脱缓冲液B。

13.以200 x g（~1000 RPM）离心组件1分钟，然后离心3200 x g（约4000转/分）持续4分钟。

DNA的储存：

使用提供的胶带密封洗脱板。纯化的DNA样品可以在–20°C下储存几天。建议将样品放置在–70°C的温度下用于长期储存

来源：https://www.amyjet.com/products/NGB-61900.shtml